曲古抑菌素A對喉鱗癌細胞株Hep-2細胞的凋亡作用及相關分子機制.pdf

1、目的:
　　研究組蛋白去乙酰化酶抑制劑曲古抑菌素A(trichostatinA，TSA)對人喉鱗癌細胞株Hep-2細胞增殖和凋亡的影響及可能的作用機制。
　　方法:
　　1、人類喉鱗癌細胞株Hep-2細胞的維持及擴大培養(yǎng)。
　　2、應用CCK-8法檢測不同濃度(0.2、0.5、1.0、2.0、5.0μmol/L) TSA對喉鱗癌細胞株Hep-2細胞增殖的抑制作用并計算24小時半數(shù)抑制率(IC50)
　　3、

2、應用流式細胞儀(FCM)技術研究TSA對喉鱗癌細胞株Hep-2凋亡的影響。
　　4、采用實時定量PCR方法檢測Bcl-2、Bax、C-myc、Survivin、 mTOR、p70S6K基因的表達。
　　5、運用Western Blot方法檢測細胞Bcl-2、Bax、p70S6K蛋白含量的表達。
　　6、統(tǒng)計學處理:不同濃度曲古抑菌素對細胞生長的抑制采用One-wayANOVA方差分析，P＜0.05是認為差異有統(tǒng)計學意義

3、。
　　結果:
　　1、Hep-2細胞培養(yǎng)于DMEM培養(yǎng)液中，細胞生長良好呈貼壁生長，生長迅速，3天傳代一次，細胞生長密集時可呈多層重疊生長，取對數(shù)期生長良好的細胞進行一系列實驗。
　　2、CCK-8檢測結果顯示不同藥物濃度組均可抑制Hep-2細胞的生長，且呈劑量依賴性，各實驗組之間及實驗組與對照組差別均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。TSA作用于Hep-2細胞24小時的IC50值為2.0μmol·L-1。
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4、、流式細胞儀(FCM)檢測后發(fā)現(xiàn)經(jīng)不同濃度TSA作用24小時后，Hep-2細胞凋亡率(1.07％、2.45％、9.31％、15.32％)隨TSA作用濃度(0、0.2、1.0、2.0μmol/L)升高而增高，且具有濃度依賴性。
　　4、RT-PCR檢測表明，經(jīng)不同濃度TSA作用24小時后，Hep-2細胞的Bcl-2、C-myc、Survivin mRNA的表達隨TSA濃度增加而下降，Bax、mTOR、p70S6K mRNA的表達則隨

5、TSA濃度增加而增加(p＜0.05)。
　　5、Western Blot檢測結果顯示經(jīng)TSA作用24小時后，Hep-2細胞的Bcl-2蛋白表達隨TSA濃度增加而下降，Bax、p70S6K蛋白表達隨TSA濃度增加而增加(p＜0.05)。
　　結論:
　　1、TSA能夠誘導體外培養(yǎng)的人喉鱗癌細胞株Hep-2細胞凋亡，且隨著藥物濃度的增加，細胞凋亡率增大，具有濃度依賴性。
　　2、TSA對Hep-2細胞生長抑制和誘導凋