樹鼩Toll-LikeReceptor1基因的克隆及序列分析.pdf

1、目的：對樹鼩Toll樣受體1(Toll like receptor1，TLR1)基因進(jìn)行克隆和測序，對其序列進(jìn)行分析以了解其蛋白結(jié)構(gòu)及相關(guān)功能。為今后應(yīng)用樹鼩作為病毒感染動(dòng)物模型開展病毒識(shí)別機(jī)制和防治策略研究提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：在GenBank中查找人類、黑猩猩、獼猴、小鼠、褐家鼠、成都麻羊、野馬、野豬、中國荷斯坦牛、家犬共十種物種的TLR1的mRNA基因序列，在其高度保守區(qū)設(shè)計(jì)樹鼩TLR1基因的簡并引物；運(yùn)用RT-PCR方

2、法從樹鼩外周血總RNA中體外擴(kuò)增樹鼩TLR1的cDNA基因序列；將擴(kuò)增的目的基因片段純化回收與T載體連接；轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌，篩選陽性克隆子并用菌落PCR驗(yàn)證；轉(zhuǎn)化成功后進(jìn)行測序，將測序結(jié)果用NCBI的BLAST工具進(jìn)行檢索比對序列，確認(rèn)其為樹鼩TLR1基因序列；并用生物信息學(xué)軟件對序列結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析預(yù)測。
　　結(jié)果：1.在體外成功擴(kuò)增出樹鼩TLR1的cDNA片段，回收獲得其目的基因片段；2.成功篩選出陽性克隆子并進(jìn)行DNA測序，獲得樹

3、鼩TLR1的cDNA部分基因序列，序列長度為1110bp。
　　結(jié)論：運(yùn)用生物信息學(xué)軟件對樹鼩TLR1基因序列進(jìn)行分析，預(yù)測該基因序列編碼370個(gè)氨基酸，包括了TLR1序列跨膜區(qū)、C端富含亮氨酸重復(fù)基序(LRR)結(jié)構(gòu)域和部分胞外區(qū)，分子量為42.33kDa，等電點(diǎn)為8.24。含有11個(gè)絲氨酸(Ser)、3個(gè)蘇氨酸(Thr)和6個(gè)酪氨酸(Tyr)位點(diǎn)可能成為蛋白質(zhì)的磷酸化位點(diǎn)。氨基酸序列比對分析表明，樹鼩TLR1基因序列與人類的TL