檸檬醛調(diào)控突變型p53基因和AIF基因表達(dá)誘導(dǎo)急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株NB4凋亡.pdf

1、急性白血病是起源于造血干細(xì)胞的惡性克隆性血液系統(tǒng)疾病，急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL）作為急性白血病的特殊亞型，有特異性t（15；17）（q22；q21）染色體異位，形成PML/RARα融合基因。臨床上急性早幼粒細(xì)胞白血病的經(jīng)典方案是全反式維甲酸（ATRA）聯(lián)合三氧化二砷（ATO）雙誘導(dǎo)治療，這種治療方案可以促使白血病細(xì)胞向正常細(xì)胞分化，誘導(dǎo)疾病緩解。但是治療過程中全反式維甲酸出現(xiàn)的分化綜合征、三氧化二砷導(dǎo)致的嚴(yán)重重金屬毒性，以及部分AP

2、L患者對維甲酸、三氧化二砷治療不敏感等，APL患者的近期治療效果和遠(yuǎn)期生存均受到影響。前期研究發(fā)現(xiàn)，天然植物山蒼子的主要成分檸檬醛（Citral）具有誘導(dǎo)APL細(xì)胞株NB4細(xì)胞凋亡的作用，并對人體正常脾細(xì)胞和淋巴細(xì)胞無明顯抑制作用。課題組前期對檸檬醛誘導(dǎo)APL細(xì)胞株NB4細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制進(jìn)行了初步研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)檸檬醛可以誘導(dǎo)白血病細(xì)胞株NB4凋亡，流式細(xì)胞技術(shù)和RT-PCR技術(shù)檢測到線粒體的膜電位（MMP）下降，凋亡基因Bcl-2、核

3、因子N F-?B的表達(dá)量下降，Bax基因、caspase-3蛋白的表達(dá)量明顯升高。本實(shí)驗(yàn)在前期基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討檸檬醛誘導(dǎo)APL細(xì)胞株NB4凋亡的分子機(jī)制，為檸檬醛藥用價值的開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討檸檬醛作用APL細(xì)胞株NB4后，凋亡調(diào)節(jié)基因突變型p53(mutant p53,mtp53)、凋亡誘導(dǎo)因子AIF基因表達(dá)的變化，研究檸檬醛誘導(dǎo)急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株凋亡的分子機(jī)制。
　　方法：NB4細(xì)胞處于

4、對數(shù)生長期時，檸檬醛實(shí)驗(yàn)組分別加入不同濃度梯度的檸檬醛溶液（5、10、20μg/ml，培養(yǎng)基乙醇終濃度5‰）培養(yǎng)。同時設(shè)立兩組對照，空白對照和乙醇對照?？瞻讓φ战M：培養(yǎng)基中不加檸檬醛和5‰乙醇進(jìn)行 NB4細(xì)胞培養(yǎng)；乙醇對照組：培養(yǎng)基中不加檸檬醛，僅加乙醇至終濃度5‰進(jìn)行 NB4細(xì)胞培養(yǎng)。各組 NB4細(xì)胞培養(yǎng)48h后，實(shí)時熒光定量 PCR（qPCR）法檢測 mtp53基因和凋亡誘導(dǎo)因子AIF基因的mRNA表達(dá)變化。
　　結(jié)果：

5、>　?。?）、5‰乙醇對照組與空白對照組相比，NB4細(xì)胞生長計數(shù)、mtp53基因和AIF基因的mRNA表達(dá)均無顯著差異。
　?。?）、各檸檬醛實(shí)驗(yàn)組和乙醇對照組相比，同一時間段細(xì)胞生長計數(shù)均有所下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。不同濃度檸檬醛實(shí)驗(yàn)組之間，細(xì)胞生長計數(shù)隨檸檬醛濃度的遞增逐漸下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　（3）、各檸檬醛實(shí)驗(yàn)組與乙醇對照組相比，mtp53 mRNA的表達(dá)均有所降低，隨檸檬醛濃度遞增（5、10、20μg/ml