硒化殼聚糖對急性早幼粒細胞性白血病NB4細胞的作用及其機制探討.pdf

1、急性早幼粒細胞性白血病(APL)是急性白血病中的一種特殊類型，約占髓細胞性白血病的10％。 95％以上的APL具有特征性的t(15：17)染色體異位，即位于15號染色體上的早幼粒細胞白血病(PML)基因與位于17號染色體上的維甲酸受體α(RAR α)基因相互異位，所形成的PML-RARα融合基因表達的融合蛋白分子量約為110KD，具有一定的酪氨酸激酶活性，增高的酪氨酸激酶活性可使融合蛋白自身及細胞內(nèi)多種底物分子磷酸化，進而募集和結合許多

2、轉(zhuǎn)接蛋白分子，從而激活許多相關的細胞信號通路，使細胞異常增殖，在APL的發(fā)病和治療中起著關鍵作用。故而降低APL細胞內(nèi)融合蛋白含量，抑制其酪氨酸激酶活性，阻斷其可能的細胞信號傳導途徑已成為當前針對分子靶點進行治療的策略。 硒化殼聚糖是將殼聚糖與亞硒酸在酸性條件下，以混合金屬離子為催化劑制備而成的一種低分子量有機硒，可有效克服無機硒不易被細胞吸收，活性和毒性范圍較窄，致死量相對較小等缺點。硒和砷屬同族，而砷在臨床上早已做為一種抗A

3、PL藥物使用。故硒化殼聚糖也應具有抗APL的作用，且毒副作用應該比無機硒和砷小得多。 本課題以表達PML-RAR α融合蛋白的NB4細胞為試驗對象，全面觀察硒化殼聚糖對NB4細胞增殖、凋亡和分化的影響，以及硒化殼聚糖與常用的化療藥合用對NB4細胞作用的特點，探索硒化殼聚糖對NB4細胞作用的最適濃度及對融合基因、融合蛋白、細胞周期蛋白以及相關信號傳導通路的影響等，為硒化殼聚糖的臨床應用奠定基礎。 研究結果表明，硒化殼聚糖可

4、明顯升高細胞內(nèi)GSH-PX活力，降低MDA含量和SOD活性。在本實驗條件下，50mg/L的硒化殼聚糖可誘導NB4細胞向正常成熟細胞方向分化，若增加劑量至100mg/L及以上，藥物對細胞則主要產(chǎn)生誘導凋亡方面的作用；硒化殼聚糖和亞硒酸鈉對NB4細胞都可產(chǎn)生明顯的細胞毒作用，且呈量效和時效關系，它們的IC<,50>分別是103.7mg/L和16.7umol/L，以同等含硒量來比較其效應，則硒化殼聚糖的作用效果約為亞硒酸鈉的三倍；以激光共聚焦

5、顯微鏡、AO/EB熒光染色法、流式細胞儀檢測、DNA片段化凝膠電泳測定以及電鏡超微結構觀察等方法分析表明，硒化殼聚糖可誘導NB4細胞凋亡，阻斷細胞于GO/G1期，提示硒化殼聚糖對APL的治療可能具有一定的價值。硒化殼聚糖與ADM同時合用對NB4細胞可產(chǎn)生單純相加至增強的協(xié)同殺傷效果，尤其是硒化殼聚糖與低濃度ADM的協(xié)同作用更為顯著。硒化殼聚糖與ADM序貫給藥時二藥可產(chǎn)生單向協(xié)同，但協(xié)同效果不如同時合用顯著。 本實驗結果還顯示，1

6、、硒化殼聚糖可明顯減少NB4細胞內(nèi)PML-RARα融合蛋白含量，呈量效、時效關系，但硒化殼聚糖對PML-RARα融合基因的轉(zhuǎn)錄沒有影響。2、硒化殼聚糖可降低NB4細胞內(nèi)cyclinD1的表達。3、硒化殼聚糖可降低NB4細胞內(nèi)c-jun和MEK-1信號分子的含量，從而抑制了Ras信號傳導通路。4、硒化殼聚糖可減少NB4細胞核內(nèi)NF-KB的含量，從而抑制了NF-KB信號傳導通路。5、硒化殼聚糖可提高NB4細胞內(nèi)cAMP含量，降低cGMP的含

7、量，增加cAMP與cGMP的比值。6、硒化殼聚糖可使細胞內(nèi)鈣離子濃度呈劑量與時間依賴性提高。7、50mg/L的硒化殼聚糖可增加NB4細胞膜上CD11b抗原分子的表達。以上這些作用可能都與硒化殼聚糖能抑制細胞增殖，誘導細胞凋亡，促進細胞分化作用密切相關。 綜上所述，硒化殼聚糖可能通過減少NB4細胞內(nèi)PML-RARα融合蛋白和cyclinD1蛋白的含量，抑制細胞內(nèi)Ras信號途徑和NF-KB信號途徑，提高細胞內(nèi)cAMP含量，降低cGM