紫草素對急性早幼粒細胞白血病NB4細胞增殖凋亡的影響及相關(guān)機制的研究.pdf

1、目的：
　　研究紫草素對人急性早幼粒細胞白血病NB4細胞增殖與凋亡的影響及其相關(guān)作用機制。
　　方法：
　　1.以NB4細胞株作為研究對象，用梯度濃度的紫草素分別作用于NB4細胞不同時間后，CCK-8實驗測定細胞增殖情況；
　　2.以0.3μmol/L紫草素作用于NB4細胞，培養(yǎng)1 d后，通過流式細胞術(shù)檢測細胞周期的改變和凋亡的改變；
　　3.經(jīng)Hochest33342實驗，通過熒光顯微鏡檢測NB4細胞的胞

2、核的形態(tài)學(xué)改變；
　　4.Western blot檢測細胞c-Myc,PARP,Caspase3,Cleaved PARP,Cleaved Caspase3,ERK,p-ERK,JNK,p-JNK,p38MAPK及p-p38MAPK蛋白表達情況；
　　5.構(gòu)建NB4細胞裸鼠移植瘤模型，通過描繪腫瘤生長曲線分析紫草素對裸鼠腫瘤發(fā)展情況的作用；
　　6.通過免疫組化技術(shù)檢測紫草素對抑制瘤組織中增殖指標(biāo) c-Myc表達的影響

3、。
　　結(jié)果：
　　1. NB4細胞經(jīng)紫草素處理后，細胞活力受到抑制(P＜0.01)，并且具有時間依賴性及濃度依賴性；
　　2.流式細胞術(shù)檢測到NB4細胞經(jīng)紫草素處理后，G1期細胞比例上升(P＜0.01)，G2期和S期細胞比例下降(P＜0.01)；細胞凋亡率明顯增加(P＜0.01)；
　　3.紫草素處理NB4后，經(jīng)Hochest33342著色，在熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn)細胞表現(xiàn)出核固縮，染色質(zhì)聚集凝集，核破碎等現(xiàn)象；

4、r>　　4.紫草素作用細胞1 d后，Western blot檢測到凋亡相關(guān)蛋白Cleaved PARP,Cleaved Caspase3表達明顯增多(P＜0.01)，p-JNK和p-p38MAPK蛋白水平明顯升高(P＜0.01)，p-ERK和c-Myc蛋白表達水平明顯降低(P＜0.05)；
　　5.紫草素能夠顯著抑制移植瘤生長(P＜0.05)；
　　6.免疫組化結(jié)果顯示，紫草素處理組增殖蛋白c-Myc表達與對照組相比顯著降低