糖多孢紅霉菌染色體基因快速失活技術(shù)研究及應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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1、紅霉素(erythromycin，Er)是由糖多孢紅霉菌(Saccharopolyspora erythraea)合成的次生代謝產(chǎn)物,為一類(lèi)廣譜大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素,在臨床上具有廣泛應(yīng)用。2007年,糖多孢紅霉菌基因組全序列測(cè)序完成,標(biāo)志著紅霉素的研究進(jìn)入了后基因組時(shí)期。為加速糖多孢紅霉菌基因功能研究,本研究建立了糖多孢紅霉菌線性片段同源重組一步基因突變技術(shù),并開(kāi)展了應(yīng)用研究。
　　本實(shí)驗(yàn)以KR6基因?yàn)椴牧?以Thio抗性基因(tsr

2、)作為篩選標(biāo)記,在其上下游分別連接KR6基因突變序列的兩側(cè)同源片段,利用PEG介導(dǎo)原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化將線性DNA同源片段轉(zhuǎn)入糖多孢紅霉菌,通過(guò)tsr基因兩側(cè)同源片段與染色體同時(shí)重組,一步實(shí)現(xiàn)KR6基因快速敲除;線性同源片段長(zhǎng)度與糖多孢紅霉菌染色體同源重組效率密切相關(guān),同源片段長(zhǎng)度在500bp左右時(shí),線性片段與染色體有效重組率很低,而同源片段長(zhǎng)度超過(guò)1000bp時(shí),可獲得有效的基因失活突變菌株;以此技術(shù)為依托,本研究快速構(gòu)建了糖多孢紅霉菌?bl

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