60Co-γ射線對糖多孢紅霉菌的重復(fù)誘變研究.pdf

1、隨著抗生素耐藥性問題日益嚴(yán)重， 迫切需要尋找新型抗菌藥物。酮內(nèi)酯類抗生素在對付耐藥菌方面作用突出，是最有希望的新型抗菌藥物。利用同源重組方已構(gòu)建了糖多孢紅霉菌M，可以合成一種新酮內(nèi)酯類化合物——3-脫氧-3-羰基-紅霉內(nèi)酯B，然而產(chǎn)量較低，產(chǎn)物沒有抑菌活性。通過60Co-γ射線對糖多孢紅霉菌M進行誘變，選育出的糖多孢紅霉菌963和967雖然產(chǎn)物具有抑菌活性，但產(chǎn)量有待進一步提高。
　　 通常復(fù)合誘變具有較好的誘變效果。本實驗選用

2、60Co-γ射線對分別糖多孢紅霉菌963和967進行重復(fù)誘變選育，以期獲得高產(chǎn)突變株。在對孢子稀釋液的選擇上，分別用生理鹽水和5％、10％、20％、40％和80％甘油適當(dāng)稀釋孢子，以不同劑量輻照處理（不輻照的樣品為空白對照），涂平板，計數(shù)并計算孢子致死率，選擇適宜的孢子稀釋液和適宜的輻照劑量；采用適宜的條件對孢子進行重復(fù)誘變處理，并結(jié)合一定濃度的鏈霉素R3M抗性平板篩選突變株。觀察菌株形態(tài)，取誘變株發(fā)酵液做枯草桿菌抑菌試驗，篩選正突變，

3、計算突變率，并研究60Co-γ射線對糖多孢紅霉菌963和967的重復(fù)誘變效應(yīng)。為了初步探討鏈霉素抗性篩選方法，以糖多孢紅霉菌963為研究對象，同時采用在R3M平板中逐漸提高鏈霉素濃度的方法對誘變株進行篩選。
　　 測定鏈霉素最低抑制濃度的實驗表明，隨著鏈霉素濃度的增加，其對糖多孢紅霉菌963和967的抑制作用增強。當(dāng)鏈霉素濃度分別達到140μg/mL和120μg/mL時，平板上無可再生菌株，為最小致死濃度。在固定鏈霉素濃度抗性篩

4、選法實驗中，選用130μg/mL和110μg/mL鏈霉素抗性平板對誘 變株進行篩選；在增加鏈霉素濃度抗性篩選法實驗中，以糖多孢紅霉菌963作為研究對象，將濃度由130μg/mL逐漸增加到140μg/mL、150μg/mL和160μg/mL。
　　 通過比較生理鹽水和5％、10％、20％、40％和80％甘油對輻照孢子生長的影響以及實驗的可操作性，發(fā)現(xiàn)生理鹽水作孢子稀釋液為宜。實驗表明，輻照劑量越高，孢子致死率越高。當(dāng)劑量為500G

5、y時，糖多孢紅霉菌963和967的孢子致死率均為90％左右，選擇為最佳誘變劑量。
　　 利用60Co-γ對糖多孢紅霉菌963的重復(fù)誘變選育時，獲得了一株正突變株，其抑菌活性明顯增強，遺傳穩(wěn)定，正突變率達2.01‰；有12株形態(tài)變異株，其產(chǎn)孢時間、孢子顏色等均發(fā)生較大變化，形態(tài)變異率為24.1‰。與單次誘變相比，重復(fù)誘變獲得了較好效果。
　　 增加鏈霉素抗性選擇壓篩選實驗結(jié)果顯示，與固定選擇壓相比，雖然形態(tài)變異有了顯著提高