系統(tǒng)性硬皮病CD40L基因逃避X染色體失活的機制及作用研究.pdf

1、目的:系統(tǒng)性硬皮病(systemic sclerosis，SSc)是一種自身免疫性結締組織疾病，以自身抗體產生、皮膚及多系統(tǒng)器官進行性纖維化、微血管病變?yōu)橹饕卣?，發(fā)病率具有明顯性別差異，80％以上患者為女性，其發(fā)病機制目前尚未完全清楚。有研究發(fā)現CD40配體(CD40L)在SSc病人和硬皮病模型小鼠中過度表達，但CD40L在SSc中表達增高的機制尚不清楚。我課題組之前研究發(fā)現DNA甲基化抑制劑可激活正常女性原失活的X染色體，導致CD4

2、0L過度表達。因此，本課題通過比較男女SSc患者CD40L表達水平和其調控序列DNA甲基化狀態(tài)，試圖探討SSc患者CD40L增高的原因，為該病發(fā)病機制的研究提供新的思路。
　　 方法:密度梯度離心法分離26例SSc患者（女16例，男10例）和25例健康對照者（女15例，男10例）的外周血單個核細胞，流式細胞術檢測CD4+T細胞中CD40L的表達水平;磁珠分選CD4+T細胞，實時定量聚合酶鏈反應（real-time RT-PCR）

3、檢測CD40L的mRNA表達水平;亞硫酸氫鈉測序檢測CD4+T細胞中CD40L基因調節(jié)序列的甲基化狀態(tài)。
　　 結果:與女性正常對照組相比，女性SSc患者CD4+T細胞中CD40LmRNA的表達水平顯著升高(P＜0.05)，CD40L的蛋白表達水平亦顯著升高(P＜0.05);亞硫酸氫鈉測序結果顯示正常女性CD40L基因調控序列一半呈甲基化，一半呈去甲基化，而正常男性CD40L相同序列大部分呈去甲基化，女性SSc患者CD40L基因

4、啟動子和增強子區(qū)域平均甲基化水平均顯著低于女性正常對照(P＜0.001; P＜0.001)，并且女性SSc患者CD40L啟動子和增強子區(qū)域平均甲基化水平與其CD40LmRNA表達水平呈顯著負相關（r=-0.629，P＜0.01;r=-0.727， p＜0.01);男性SSc患者組與男性正常對照組CD40L mRNA和蛋白表達水平均無顯著差異(P＞0.05; P＞0.05)，并且兩組CD40L基因啟動子和增強子區(qū)域甲基化程度均較低，其平均