產(chǎn)蛋白酶乳酸菌種的篩選及應(yīng)用研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)旨在開發(fā)一種在產(chǎn)生乳酸，降低腸道pH的同時(shí)，還能夠分泌蛋白酶，提高飼料蛋白利用率的乳酸菌。 本實(shí)驗(yàn)以實(shí)驗(yàn)室保存的21種乳酸菌，進(jìn)行產(chǎn)蛋白酶乳酸菌株的篩選。從以下幾方面進(jìn)行研究：產(chǎn)蛋白酶菌種的篩選：對其進(jìn)行生化和分子水平的鑒定;所產(chǎn)蛋白酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究;篩選所得菌種的超濃縮培養(yǎng)基；菌種馴化；將其作為微生態(tài)制劑應(yīng)用劍奶牛的飼喂中，觀察其對奶牛生產(chǎn)性能的影響。 本實(shí)驗(yàn)所得的研究結(jié)果如下： 通過酪蛋白平板

2、培養(yǎng)基產(chǎn)透明圈結(jié)合福林法測定蛋白酶活力方法，篩選得到產(chǎn)蛋白酶的乳酸菌種。通過對此乳酸菌株進(jìn)行生化水平和特異PCR鑒定，得出此乳酸菌屬于乳酸乳球菌乳酸亞種AS1.1936。通過SephadexG-75分子篩柱層析純化了培養(yǎng)液中乳酸菌所產(chǎn)的胞外蛋白酶，并且確定了此蛋白酶的分子質(zhì)量在35KD左右。通過對所產(chǎn)蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)研究確定此蛋白酶屬于酸性蛋白酶，最適作用溫度為40℃；Mn2+對該酶有明顯的激活作用：篩選得到該菌種超濃縮培養(yǎng)基，通過此培

3、養(yǎng)基培養(yǎng)后乳酸菌AS1.1936的活菌數(shù)達(dá)劍了1.05x1010cfu/ml。本實(shí)驗(yàn)初步獲得乳酸菌產(chǎn)蛋白酶的馴化方法，即先通過在酪蛋白瓊脂平板培養(yǎng)基上馴化，之后復(fù)壯，再馴化，直至酪蛋白的濃度由0.5％達(dá)到5.0％(每0.5％為一個(gè)梯度)為止。將乳酸菌種作為微生態(tài)制劑添加到奶牛的精飼料中，可使奶牛乳產(chǎn)量提高4.08％，乳脂率提高19.51％，干物質(zhì)率提高8.07％，差異均極顯著(P＜0.01)。對乳蛋白率無顯著影響。 本實(shí)驗(yàn)成功的