鉛脅迫下黑心菊轉(zhuǎn)錄組分析及擬南芥愈傷組織受體系統(tǒng)的建立.pdf

1、鉛是一種有毒的重金屬元素，不僅對生態(tài)環(huán)境造成危害，也會通過食物鏈等途徑進(jìn)入人體，嚴(yán)重危害人體健康。利用重金屬超富集植物對土壤中的重金屬的超量吸收并向地上部分轉(zhuǎn)運(yùn)的特點，可以對被重金屬污染的土壤進(jìn)行修復(fù)。黑心菊是一種對鉛轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)較高的植物，通過添加1500mg/kg的醋酸鉛溶液對黑心菊幼苗進(jìn)行鉛脅迫處理，6個月后采集整株黑心菊作為樣品，通過高通量測序技術(shù) Illumina HiSeq，對黑心菊進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，獲得了大量的測序信息。采用農(nóng)桿

2、菌介導(dǎo)法進(jìn)行轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?，將選取的目的基因RhNRAMP1轉(zhuǎn)入到受體植物擬南芥中，通過對轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)行PCR鑒定，初步證明了目的基因已經(jīng)被整合到擬南芥的基因組中，擬南芥愈傷組織受體系統(tǒng)初步建立。研究結(jié)果如下:
　　(1)黑心菊樣品經(jīng)過RNA提取、cDNA文庫制備、Illumina HiSeq測序、過濾不合格序列及組裝等步驟后，最終得到147131條黑心菊Unigene序列，總長度為86268038 bp，平均長度為586bp，其中

3、長度在1000bp以上的Unigene有44653條。
　　(2)獲得的Unigene與Nr，Nt,Pfam，KOG，Swiss-prot，KEGG，GO七個庫進(jìn)行比對后，分別有51915、18447、36337、16381、36016、15455、36957條比對到以上數(shù)據(jù)庫。
　　(3)對Unigene進(jìn)行GO和Pathway富集分析，得到46個不同功能分類和32條代謝通路。其中GO富集分析較多的是細(xì)胞過程、代謝過程等，

4、Pathway富集分析較多的是轉(zhuǎn)導(dǎo)、碳水化合物代謝、翻譯等。
　　(4)通過對Unigene進(jìn)行CDS預(yù)測共得到111320個CDS，其中比對到公共數(shù)據(jù)庫共得到了51853個CDS，用estscan軟件預(yù)測獲得59467個CDS。(5)6-BA濃度為1.0mg/L和NAA濃度為0.1mg/L的MS培養(yǎng)基較適合誘導(dǎo)擬南芥葉片愈傷組織；農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化RhNRAMP1基因的擬南芥愈傷組織，6-BA濃度為2.0mg/L和NAA濃度為0.