骨髓瘤細胞株H929的SOX2蛋白及趨化相關(guān)基因CCR1、CCR2、MCP-1等轉(zhuǎn)錄受白介素-1β預處理的骨髓間充質(zhì)干細胞影響.pdf

1、目的：觀察白介素（interleukin，IL）-1β單次或多次預處理人BMMSCs后，對BMMSCs的BMP-2表達的影響；以及不同方案預處理的BMMSCs與MM細胞株共培養(yǎng)后，觀察其對骨髓瘤細胞的干細胞相關(guān)蛋白、趨化細胞因子及其相關(guān)受體等表達的影響。
　　方法：1、實驗分三組：A組：為無IL-1β預處理的BMMSCs對照組、B組：為IL-1β預刺激1天、C組：IL-1β每天預刺激1次，共連續(xù)處理7天。三組分別加入骨髓瘤細胞株H

2、929直接接觸共培養(yǎng)，3天后收集各組中H929細胞。觀察各組細胞形態(tài)及生長狀況。
　　2、采用細胞免疫組織化學染色法檢測各組BMMSCs的BMP-2的表達，同時加用NF-kB的抑制劑（Pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC），研究NF-kB通路在BMMSCs的BMP-2表達的影響。
　　3、采用 Western blot方法檢測各組H929細胞 NANOG、SOX2和OCT-4蛋白的表達水平。

3、r>　　4、采用RT-PCR方法檢測各組H929細胞因子CCR1、CCR2、CCR6、CXCR4、MCP-1、MIP-1α和DKK1的表達水平。
　　結(jié)果：1、倒置顯微鏡觀察示：各組BMMSCs均能在體外貼壁生長。經(jīng) IL-1β預處理1 d和7 d后的BMMSCs，其形態(tài)與對照組均無明顯區(qū)別，均呈梭形。H929細胞呈懸浮生長，部分細胞可聚集成串珠樣葡萄狀。單獨培養(yǎng)與共培養(yǎng)的BMMSCs、H929細胞，形態(tài)上無明顯差別。
　　

4、2、細胞免疫組化結(jié)果顯示：與組A組比較，B組、C組BMMSCs的BMP-2表達增高；用NF-kB的抑制劑PDTC預處理后，實驗組B、C兩組BMP-2表達水平明顯降低。
　　3、Western blot結(jié)果顯示：與A組比較，H929細胞株和B組、C組共培養(yǎng)后，SOX2蛋白表達水平升高，且B組、C組SOX2蛋白表達水平的相對灰度值與A組間存在統(tǒng)計學差異（P<0.05；n=5）。A、B、C三組間NANOG、OCT-4蛋白的表達均無統(tǒng)計學

5、差異。
　　4、RT-PCR結(jié)果顯示：與A組、B組比較，H929細胞株和C組共培養(yǎng)后， CCR1、CCR2、MCP-1、MIP-1α基因的相對表達水平均增高，且其存在統(tǒng)計學差異（P<0.05；n=6）。但三組間CCR6、CXCR4、DKK1基因的相對表達量無統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論：我們的體外實驗結(jié)果顯示，IL-1β單次或多次刺激正常骨髓 BMMSCs后，可增加BMMSCs的BMP-2表達，并且BMP-2表達的上調(diào)能被NF-k