Bmi-1基因表達與人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的關(guān)系探討.pdf

1、背景：骨髓間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)是存在于骨髓中的多能干細胞，由于其來源方便、擴增相對容易、自體移植不存在免疫排斥反應(yīng)，且不存在胚胎干細胞、神經(jīng)干細胞有可能涉及到的倫理道德問題，因此成為較理想的細胞治療、基因治療及組織再生的工具，在臨床應(yīng)用上受到越來越廣泛的關(guān)注。目前已用于聯(lián)合造血干細胞進行異基因骨髓移植、糾正某些先天性疾病(如先天性成骨發(fā)育不全)、治療腦血管病和神經(jīng)變性病以及心血管疾病等。

2、由于MSCs在骨髓中存在的數(shù)量少，又缺少特異性表面標記，因此在臨床應(yīng)用前必須進行擴增。但長期培養(yǎng)過程使MSCs的增殖能力減弱，細胞變平、增寬，呈現(xiàn)老化征象，使其應(yīng)用受到一定的限制。因此尋找影響MSCs增殖能力的相對特異基因并探討其作用機制，將為轉(zhuǎn)基因修飾MSCs以維持細胞的增殖、盡可能避免腫瘤發(fā)生發(fā)揮重要作用。 干細胞的增殖受到外部信號及內(nèi)在遺傳機制的調(diào)節(jié)。目前對外部信號研究較多，(如Notch、Wnt等信號通路調(diào)節(jié)造血干細胞、

3、神經(jīng)干細胞的自我更新)，而對內(nèi)在遺傳機制了解相對較少，Bmi-1基因是其中一個為數(shù)不多的已知的干細胞內(nèi)在調(diào)節(jié)基因，它是Polycomb group家族成員，是維持神經(jīng)干細胞、造血干細胞、腫瘤干細胞自我更新及小腦顆粒神經(jīng)元祖細胞增殖所必須的，通過部分抑制衰老相關(guān)基因來實現(xiàn)其調(diào)節(jié)功能。它的缺失會引起神經(jīng)系統(tǒng)、造血系統(tǒng)異常，腦組織發(fā)育遲滯，神經(jīng)干細胞的克隆形成率明顯下降，造血干細胞池明顯減少，表現(xiàn)出自我更新能力的降低。 方法：利用貼壁

4、培養(yǎng)法，分別從5個非造血系統(tǒng)疾病患者的髂后上棘抽取骨髓并分離培養(yǎng)出hMSCs,并進行擴增，流式細胞儀檢測細胞表型，繪制hMSCs的生長曲線，取第三代和第九代hMSCs為研究對象，進行SA-β-gal染色，比較老化指標SA-β-gal的變化，通過抽提各代次細胞的RNA，逆轉(zhuǎn)錄PCR定量Bmi-1基因量的變化，分析與細胞倍增代數(shù)的關(guān)系。 結(jié)果：我們利用長期培養(yǎng)的hMSCs，比較第一代、第三代、第六代、第九代、第十二代、第十五代細胞B