熱激導(dǎo)致小鼠生精細(xì)胞中MPF變化的動(dòng)態(tài)過程.pdf

1、陰囊類哺乳動(dòng)物的精子發(fā)生過程依賴于陰囊內(nèi)低于體溫的環(huán)境，如果睪丸處于溫度較高的環(huán)境中(如人類的隱睪癥、精索靜脈曲張等)就有可能導(dǎo)致生精障礙甚至引起不育。本實(shí)驗(yàn)室以前的研究發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)性單側(cè)隱睪的兔睪丸組織中，生精細(xì)胞由有絲分裂向減數(shù)分裂過渡的過程被阻斷，除了精原細(xì)胞以外的其它類型生精細(xì)胞發(fā)生凋亡。同時(shí)，精母細(xì)胞中CyclinBl和p34<'cdc2>蛋白合成受阻，導(dǎo)致促成熟分裂因子(Maturation-promoting factors

2、，MPF)無法形成。由于MPF是眾所周知細(xì)胞分裂的驅(qū)動(dòng)器，因而，本研究的內(nèi)容除了可以解釋上述現(xiàn)象的原因外，還涉及到細(xì)胞周期運(yùn)行和調(diào)控等重要的熱點(diǎn)問題，所以，我們建立了小鼠熱激模型，進(jìn)一步地研究了高溫影響生精細(xì)胞中CyclinBl和p34<,cdc2>表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化過程。 結(jié)果顯示，小鼠睪丸組織經(jīng)42℃熱激30分鐘后，6小時(shí)內(nèi)尚未發(fā)生細(xì)胞形態(tài)上的變化，8小時(shí)－24小時(shí)，曲細(xì)精管中的細(xì)胞排列紊亂，生精細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞并最終裂解

3、，曲細(xì)精管出現(xiàn)大量空泡化。此后，生精過程才得以逐漸恢復(fù)。采用TuNEL法對(duì)熱激后生精細(xì)胞凋亡開始時(shí)間、凋亡細(xì)胞的類型以及生精細(xì)胞凋亡的發(fā)生過程進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)最早于熱激后3小時(shí)，就能檢測(cè)到初級(jí)精母細(xì)胞中的陽性凋亡信號(hào)，隨著熱激后時(shí)問的延長(zhǎng)，進(jìn)入凋亡途徑的細(xì)胞數(shù)量和類型增多，并在熱激后lO－12小時(shí)達(dá)到高峰。原位雜交結(jié)果顯示，在熱激引起的精母細(xì)胞凋亡前后，cyclinBl和cdc2的轉(zhuǎn)錄本表達(dá)的情況沒有發(fā)生太大的變化。推測(cè)熱激未明顯地阻斷

4、(：yclinBl和cdc2在精原細(xì)胞和精母細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄過程。 利用免疫組織化學(xué)和Western Blotting方法，對(duì)熱激前后CyclinB1和p34<'cdc2>蛋白的分布和相對(duì)含量進(jìn)行了進(jìn)一步的分析。結(jié)果顯示，在TF常的小鼠睪丸組織中，p34<,cdc2>和CyclinBl蛋白主要在精原細(xì)胞和精母細(xì)胞中表達(dá)，從熱激后3h開始p34<,cdc2>和CyclinBl蛋白的含量有減少的趨勢(shì)，這種趨勢(shì)持續(xù)到凋亡達(dá)最大程度(熱激

5、后24h)。Western Blotting結(jié)果進(jìn)一步顯示，在熱激后的初期(Oh-2.5h)，小鼠睪丸組織中p34<'cdc2>?蛋白的量有所增加，但熱激后3h時(shí)，p34<'cdc2>驟然減少。CyclinB1蛋白的含量變化與p34<'cdc2>的含量變化相伴隨，但CyclinBl蛋白在熱激后2.5h就已經(jīng)大量減少。 綜上可見，熱激處理并不嚴(yán)重影響小鼠睪丸組織中cyclinBl和cdc2的轉(zhuǎn)錄水平，但可使p34cdc2和Cyc