復(fù)方苦參注射液聯(lián)合順鉑對卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]
　　初步探討復(fù)方苦參注射液（CKI）能否增強(qiáng)卵巢SKOV3細(xì)胞對順鉑的敏感性，協(xié)同順鉑抑制SKOV3細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡;并探討其作用可能的影響機(jī)制，為復(fù)方苦參注射液聯(lián)合化療藥物用于治療卵巢癌提供理論依據(jù)。
　　[方法]
　　用MTT法及FITC AnnexinⅤ流式細(xì)胞技術(shù)檢測經(jīng)復(fù)方苦參注射液及順鉑作用后的卵巢SKOV3細(xì)胞的細(xì)胞增殖活力及細(xì)胞凋亡率。通過實(shí)時熒光定量PCR檢測Caspase-3、Caspa

2、se-9、Bax、Bcl-2和Survivin在mRNA水平的表達(dá)，用Western blot方法分析評估Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2和Survivin蛋白的表達(dá)水平。
　　[結(jié)果]
　　1、不同濃度的CKI和順鉑單獨(dú)及聯(lián)合作用于SKOV3細(xì)胞12h、24h、48h后進(jìn)行MTT檢測，讀取吸光度A值，求增殖抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組A490/對照組平均A490)×100％。單因素方差分析的結(jié)果顯示各組間

3、比較有統(tǒng)計學(xué)差異，復(fù)方苦參注射液及順鉑對SKOV3細(xì)胞的增殖均有抑制作用(P＜0.05)。對于同一試劑，隨著藥物濃度遞增或作用時間延長，SKOV3細(xì)胞增殖抑制率均明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，表現(xiàn)出時間和劑量依耐性。對試劑類型進(jìn)行多重比較，結(jié)果顯示復(fù)方苦參注射液和順鉑聯(lián)合用藥組對SKOV3細(xì)胞的增殖抑制率較順鉑、復(fù)方苦參注射液單獨(dú)用藥組明顯增高，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。用金正均法分析，結(jié)果顯示:復(fù)方苦參注射液和

4、順鉑聯(lián)合組各組q值均介于0.85-1.15之間，說明兩藥聯(lián)用時對SKOV3細(xì)胞的增殖的抑制作用可相加，沒有協(xié)同效應(yīng)，亦無拮抗作用。
　　2、流式細(xì)胞儀檢測顯示CKI和順鉑單用組的SKOV3細(xì)胞凋亡率顯著高于溶劑對照組，二者聯(lián)用組細(xì)胞凋亡率高于單藥組，說明CKI和順鉑均能促進(jìn)SKOV3細(xì)胞凋亡，聯(lián)合用藥抑制SKOV3細(xì)胞凋亡的效果更明顯。溶劑對照組、CKI組、順鉑組和CKI與順鉑聯(lián)用組早期凋亡的比例分別為4.7％、6.1％、9.6和

5、27.5％，晚期凋亡的比例無明顯變化，分別為7.2％、7.4％、7.8％和9.8％。
　　3、熒光定量PCR檢測結(jié)果提示:CKI和順鉑單獨(dú)作用可明顯下調(diào)Bcl-2、Survivin的mRNA表達(dá)水平，上調(diào)Caspase-3、Caspase-9及Bax的mRNA表達(dá)水平，二者聯(lián)合作用時效果更明顯。
　　4、通過western blot方法檢測用CKI、順鉑處理后的SKOV3細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示:CKI處理后的SK

6、OV3細(xì)胞的Bcl-2及Survivin蛋白的表達(dá)水平明顯下調(diào)，而Caspase-3、Caspase-9、Bax蛋白的表達(dá)水平則明顯上調(diào);使用順鉑處理的細(xì)胞，檢測蛋白的表達(dá)趨勢與CKI相似。聯(lián)合用藥時，相關(guān)蛋白的表達(dá)水平的變化更加明顯。
　　[結(jié)論]
　　1、復(fù)方苦參注射液及順鉑對SKOV3細(xì)胞的增殖均有抑制作用，且具有時間、劑量依賴性。兩藥聯(lián)用對SKOV3細(xì)胞的增殖的抑制作用可相加，無協(xié)同效應(yīng)，亦無拮抗作用。
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