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文檔簡介
1、目的:觀察RNA干擾沉默Nampt蛋白對體外培養(yǎng)的SKOV3人卵巢癌細胞生長的影響,并探討其作用機制。
方法:(1)Nampt蛋白的shRNA質(zhì)粒的構(gòu)建。(2)Nampt蛋白特異性shRNA表達載體 shRNA-Nampt經(jīng)LipofectamineTM2000介導轉(zhuǎn)染人卵巢癌SKOV3細胞。(3)噻唑藍(MTT)法檢測shRNA-Nampt卵巢癌SKOV3細胞生存率的影響。(4)流式細胞儀檢測Nampt低表達對SKOV3細胞
2、增殖的影響。(5)QRT-PCR和Western-blotting檢測低表達Nampt蛋白對人卵巢癌SKOV3細胞NAD、SIRT1、P53蛋白分子表達的影響。
結(jié)果:(1)成功構(gòu)建Nampt蛋白的shRNA質(zhì)粒并鑒定。(2)Nampt蛋白特異性shRNA表達載體shRNA-Nampt經(jīng)LipofectamineTM2000介導轉(zhuǎn)染人卵巢癌SKOV3細胞后Nampt蛋白表達降低。(3)MTT結(jié)果顯示shRNA-Nampt組人卵
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