2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、RyhB是一種大小為90bp左右的細(xì)菌非編碼小RNA,可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。前人研究表明存在于鼠傷寒沙門氏菌和霍亂弧菌中的兩種RyhB同源物RyhB-1與IsrE可調(diào)控細(xì)菌生物膜形成、趨化性和耐酸性。本研究對(duì)腸炎沙門氏菌sRNA RyhB兩種同源物RyhB-1與IsrE在腸炎沙門氏菌致病性上的作用,以及兩種同源物能否對(duì)毒力調(diào)控發(fā)揮協(xié)同作用進(jìn)行了如下的研究。
  1.腸炎沙門氏菌50336RyhB-1與IsrE在不同環(huán)境下表

2、達(dá)量檢測
  根據(jù)腸炎沙門氏菌RyhB-1與IsrE序列設(shè)計(jì)引物,利用熒光定量PCR反應(yīng)檢測二者在腸炎沙門氏菌不同生長時(shí)期時(shí)處于鐵匱乏、模擬腸道環(huán)境、感染巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)條件下的表達(dá)量,分析RyhB-1與IsrE在不同培養(yǎng)時(shí)期和不同培養(yǎng)條件時(shí)表達(dá)量的變化規(guī)律尤其是模擬宿主內(nèi)環(huán)境時(shí)表達(dá)情況,結(jié)果顯示,在鐵匱乏條件下,對(duì)數(shù)期時(shí),RyhB-1與IsrE的表達(dá)水平均比普通LB培養(yǎng)時(shí)高2倍,穩(wěn)定期時(shí),RyhB-1與IsrE的表達(dá)量分別是普通L

3、B培養(yǎng)條件下的2.5倍和3倍,表明兩種sRNA表達(dá)量的升高與該菌在缺鐵環(huán)境中需要高效吸收鐵有關(guān),推測兩種sRNA可調(diào)控鐵代謝。模擬腸道環(huán)境下,對(duì)數(shù)期時(shí)RyhB-1與IsrE的表達(dá)水平與普通LB培養(yǎng)時(shí)相比,分別上升3.5倍和3倍,穩(wěn)定期時(shí)上升1.3倍和1.5倍。與感染巨噬細(xì)胞前相比,感染1h和4h時(shí),RyhB-1的表達(dá)水平分別上升2倍與5.5倍,IsrE的表達(dá)水平分別上升4.5倍與8.5倍。表明了RyhB-1與IsrE在受到環(huán)境變化壓力下

4、被誘導(dǎo)表達(dá)使表達(dá)量顯著升高,IsrE的表達(dá)水平變化高于RyhB-1,推測二者均與腸炎沙門氏菌的毒力相關(guān),但對(duì)毒力的調(diào)控方式可能不同。
  2.腸炎沙門氏菌50336RyhB-1與IsrE雙缺失突變株及相應(yīng)回補(bǔ)株構(gòu)建
  本課題前期利用λ-Red同源重組系統(tǒng)構(gòu)建了ryhB-1和isrE單基因缺失株,本研究將繼續(xù)利用同源重組系統(tǒng)構(gòu)建出ryhB-1和isrE雙基因缺失株,在此基礎(chǔ)上,分別設(shè)計(jì)含有ryhB-1和isrE序列和上下游非

5、編碼序列以及酶切位點(diǎn)的引物,利用pBR322表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建isrE單缺失株的回補(bǔ)株50336△isrE/pisrE,利用pACYC184表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建ryhB-1單缺失株的回補(bǔ)株50336△ryhB-1/pryhB-1,利用pBR322表達(dá)質(zhì)粒和pACYC184表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建ryhB-1和isrE雙缺失株的回補(bǔ)株50336△ryhB-1/△isr E/pryh B-1/pisrE,為進(jìn)一步探索sRNA RyhB的兩種同源物ryhB-1和isr

6、E在腸炎沙門氏菌致病過程中的作用提供材料。
  3.體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)分析腸炎沙門氏菌50336 RyhB-1與IsrE在致病性方面的作用
  通過腸炎沙門氏菌野生株50336、ryhB-1和isrE單雙基因缺失株以及相應(yīng)的回補(bǔ)株檢測細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)能力、生物膜形成能力、對(duì)各運(yùn)動(dòng)性關(guān)鍵基因表達(dá)量、對(duì)宿主細(xì)胞的侵襲力和黏附力、對(duì)巨噬細(xì)胞的抗吞噬力與在巨噬細(xì)胞內(nèi)的存活率、對(duì)易感動(dòng)物1日齡雛雞的半數(shù)致死量,死亡率,體內(nèi)細(xì)菌分布,分析RyhB-1

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