JQ1誘導(dǎo)SUP-B15細(xì)胞凋亡的Notch1通路機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　費(fèi)城染色體陽(yáng)性(Ph+)急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是起源于淋巴祖細(xì)胞并且在第22對(duì)染色體長(zhǎng)臂和第9對(duì)染色體長(zhǎng)臂相互易位后產(chǎn)生了BCR-ABL融合的致癌基因的腫瘤性疾病。Ph(+)ALL屬于危險(xiǎn)度分層較高的急性白血病，它的特點(diǎn)是緩解率較Ph(-)ALL低，緩解后復(fù)發(fā)時(shí)間短，預(yù)后不好。患者隨著長(zhǎng)期的化療疾病緩解率可能會(huì)降低，緩解時(shí)間逐漸縮短，患者的身體長(zhǎng)期無(wú)法耐受

2、化療所帶來(lái)的副作用，比如感染、免疫力低下等。伴隨著酪氨酸激酶抑制劑第一代產(chǎn)品針對(duì)BCR-ABL融合致癌基因靶向治療藥物的出現(xiàn)，治療慢性髓細(xì)胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)上取得了驚人的效果，使CML這個(gè)疾病從難以治療的疾病變?yōu)榇婊钇谳^長(zhǎng)的疾病之一，之后該藥物也用于治療Ph+ALL上，同樣大大提高了該疾病的緩解率，然而在臨床用藥的過(guò)程中逐漸出現(xiàn)了耐藥情況，于是酪氨酸激酶抑制劑第二代產(chǎn)品也出現(xiàn)，但對(duì)

3、于一些基因的突變效果不令人滿意。異基因造血干細(xì)胞移植可能只有少數(shù)患者可以接受移植。因此，尋找有效一種特效的細(xì)胞毒藥物十分迫切。近年來(lái)國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)JQ1(溴結(jié)構(gòu)域蛋白抑制劑）可抑制慢性髓細(xì)胞白血病(CML)BCR-ABLT315I基因突變細(xì)胞的增殖，而研究發(fā)現(xiàn)CML慢性期轉(zhuǎn)變?yōu)榧毙云谑怯捎贛SI2過(guò)度表達(dá)激活了MSI2-Numb-Notch1的通路。Ph+ALL也具有與CML相似BCR-ABL融合基因。那么JQ1是否對(duì)Ph+ALL細(xì)胞有抑

4、制作用， JQ1能否通過(guò)下調(diào)MSI2-Numb-Notch1通路達(dá)到抗腫瘤的作用，該研究國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)的方法觀察JQ1對(duì)人Ph+ALL細(xì)胞株SUP-B15細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用及對(duì)Notch1通路上MSI2、Notch1、Hes1基因的影響,探討JQ1治療Ph(+)ALL中可能的抗腫瘤機(jī)制，為臨床醫(yī)生在Ph(+)ALL的治療提供新的治療方向。
　　方法：
　　1.不同濃度單藥JQ1作用SUP-B15細(xì)胞株24

5、h、48h、72h，實(shí)驗(yàn)采用四甲基偶氮唑藍(lán)法試驗(yàn)（MTT法)檢測(cè)的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況。
　　2.不同濃度單藥JQ1作用SUP-B15細(xì)胞48h,實(shí)驗(yàn)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的改變。
　　3.不同濃度單藥JQ1作用SUP-B15細(xì)胞株，實(shí)驗(yàn)采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)MSI2、Notch1、Hes1、Bcr-AblmRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.實(shí)驗(yàn)采用四甲基偶氮唑藍(lán)（ MTT）法檢

6、測(cè)結(jié)果的說(shuō)明：不同濃度單藥的JQ1(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L)和SUP-B15細(xì)胞一起培養(yǎng)24h、48h、72h后，SUP-B15細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的抑制現(xiàn)象。在0-4μmol/L的濃度范圍內(nèi),JQ1實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率會(huì)隨著JQ1藥物濃度的升高和作用時(shí)間延長(zhǎng)而升高，呈現(xiàn)劑量-時(shí)間依賴性。與對(duì)照組比較，在相同時(shí)間下，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.實(shí)驗(yàn)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SUP-B15細(xì)胞周期的結(jié)果說(shuō)

7、明：與對(duì)照組相比，不同濃度單藥的JQ1（1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L）作用SUP-B15細(xì)胞48h后，可以誘導(dǎo)細(xì)胞阻滯在S期，呈劑量依賴性。與對(duì)照組比較，在相同時(shí)間下，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。
　　3.實(shí)驗(yàn)采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)的結(jié)果說(shuō)明：不同濃度單藥的JQ1（1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L）作用SUP-B15細(xì)胞48h后，隨著JQ1濃度增加，MSI2、Not

8、ch1、Hes1、Bcr-AblmRNA的表達(dá)水平逐漸減少，呈劑量依賴性，在相同時(shí)間段，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.JQ1可以明顯抑制SUP-B15細(xì)胞的生長(zhǎng)，可以有效誘導(dǎo)SUP-B15細(xì)胞的凋亡。
　　2.JQ1可以使SUP-B15細(xì)胞在細(xì)胞的S期被阻滯，呈劑量依賴性，從而影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。
　　3.JQ1可以使Notch1信號(hào)通路中關(guān)鍵基因MSI2、Notch1、Hes