白藜蘆醇通過誘導細胞自噬抑制肝細胞脂肪變性的作用及機制研究.pdf

1、非酒精性脂肪性肝?。∟on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）目前已成為全球主要公共衛(wèi)生問題之一，我國成年人患病率約占20％，且有逐步發(fā)展成肝硬化甚至肝癌的趨勢，然而，至今尚未發(fā)現(xiàn)有效防治NAFLD的理想藥物。白藜蘆醇(Resveratrol，RSV)是一種天然多酚類植物化合物，已有報道稱其具有緩解NAFLD的生物學作用。但是其潛在的作用機制尚不清楚。自噬最近被認為在防止NAFLD發(fā)展過程中有關鍵的

2、保護作用。研究人員已經發(fā)現(xiàn)，自噬可將細胞內部分或全部脂滴包裹在由自噬雙層膜結構形成的囊泡內，并運送至溶酶體，使之降解為脂肪酸。自噬的增加能促進脂肪酸的β氧化，進而減少肝臟脂質的積累;同時，當自噬相關基因7(ATG7)敲除后自噬被沉默，進一步加劇了NAFLD的進展。有研究表明，RSV可通過激活內皮細胞自噬，從而抑制內皮細胞炎性反應。RSV能否通過誘導細胞自噬而抑制肝臟脂肪變性及RSV在細胞內的確切作用靶點和機制還需要進一步的研究。

3、　　本課題使用PA處理HepG2細胞建立肝細胞脂肪變性實驗模型，并用高脂肪飲食誘導小鼠建立NAFLD模型。首先，應用油紅O染色法、HE染色法、甘油三酯(triglyceride，TG)含量檢測觀察RSV對肝細胞脂肪變性的影響;然后，應用激光共聚焦、透射電鏡等技術檢測肝細胞自噬，并結合使用自噬激動劑、自噬抑制劑、RNAi和質粒轉染，研究誘導肝細胞自噬在RSV改善肝脂肪變性中的作用。最后，應用免疫印跡檢測了RSV對體內外肝細胞上調沉默信息調

4、節(jié)因子1(Silent information regulator1，SIRT1)，蛋白激酶A(Protein kinase A，PRKA)和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated Adenosine5'-monophosphate activated protein kinase, pAMPK)的表達的影響，并應用腺苷酸環(huán)化酶(Adenylyl cyclase，AC)抑制劑KH7，PRKA抑制劑H-89，AMPK抑制劑

5、Compoud C或SIRT1抑制劑EX-527，或者使用PRKA，AMPK，SIRT1的siRNA處理細胞，深入研究cAMP/PRKA/AMPK/SIRT1信號通路在RSV誘導肝細胞自噬改善肝細胞脂肪變性中的作用。
　　主要結果和結論如下:
　　(1)RSV能明顯改善肝細胞脂肪變性，主要表現(xiàn)為能減少肝細胞中TG的含量。
　　(2)自噬在RSV改善肝細胞脂肪變性中有關鍵作用。當延長RSV處理時間，及增加RSV的處理劑量

6、，肝細胞的自噬表達水平都上升，而當抑制自噬，RSV抑制肝細胞脂肪變性的作用減弱。
　　(3)RSV調控肝細胞自噬過程中，SIRT1信號通路扮演著重要角色。RSV能顯著增加肝細胞cAMP的含量，促進PRKA的表達，進而激活AMPK的表達，并促進SIRT1的表達;而當使用RNAi沉默干擾PRKA、AC、AMPK、SIRT1的表達或抑制PRKA、AC、AMPK、SIRT1的活性后，經RSV處理，肝細胞的自噬表達水平明顯下降。實驗證實，在