不同因素誘導鵝肝細胞脂肪變性的機理研究.pdf

1、肝內脂質沉積受到很多因素的影響，高能食物、葡萄糖、胰島素、膽固醇和肝臟X受體(LXR)激活劑等都可以誘導哺乳動物肝脂肪變性，水禽的肝脂肪變性與哺乳動物有不同的特性，關于水禽肝脂肪變性的機制目前還不清楚。在組織水平，通過對朗德鵝和四川白鵝進行填飼高能碳水化合物檢測了填飼對血漿葡萄糖、胰島素和膽固醇濃度、肝內脂質含量及肝內三酰甘油(TG)含量、與脂肪酸和TG合成、及VLDL-TG（極低密度脂蛋白）組裝與分泌相關基因的mRNA表達水平影響在兩

2、個品種間的差異；在細胞水平通過添加不同濃度的葡萄糖、胰島素、膽固醇和LXR激活劑T0901317培養(yǎng)鵝原代肝細胞，檢測生酯酶脂肪酸合成酶(FAS)和乙酰輔酶A羧化酶(ACC)酶活性、細胞內外TG含量及總TG含量、細胞外VLDL濃度、相關基因表達水平；并用westernblot和凝膠電泳遷移實驗(EMSA)方法檢測了葡萄糖和胰島素、膽固醇和LXR激活劑T0901317處理細胞后轉錄因子固醇調節(jié)元件結合蛋白-1(SREBP-1)的蛋白變化及

3、SREBP-1的核蛋白與靶基因ACCα的結合情況。主要結果如下：
　　 (1)填飼引起脂質大量沉積在鵝肝臟內，朗德鵝肝內脂質沉積強度要高于四川白鵝；填飼引起的血漿胰島素和膽固醇水平的增加程度也存在品種差異，朗德鵝的變化大于四川白鵝(P＜0.05)；而填飼后血漿葡萄糖在朗德鵝中上升，在四川白鵝中下降(P＜0.05)。填飼后與脂肪酸合成相關的基因ACCα、FAS、SREBP-1和碳水化合物反應元件結合蛋白(ChREBP)在肝組織中的

4、表達水平降低(P＜0.05)；脂蛋白酯酶(LPL)和LXRαmRNA表達量顯著升高(P＜0.05);VLDL-TG組裝與分泌相關基因微粒體甘油三酯轉運蛋白(MTTP)基因表達顯著降低(P＜0.05)；填飼誘導的基因表達水平的變化在兩個品種中顯著不同，SREBP-1、ChREBP和MTTP基因表達水平在朗德鵝中的降低程度大于四川白鵝(P＜0.05)，LPL基因表達的升高程度在朗德鵝中大于四川白鵝(P＜0.05)。
　　 (2)葡萄

5、糖和胰島素分別單獨與肝細胞培養(yǎng)后顯著增加生酯酶FAS和ACC的活性、脂肪酸合成相關基因FAS、ACCα、SREBP-1、ChREBP、LXRα和硬脂酰輔酶A去飽和酶1(SCD1)的基因表達水平及細胞內TG含量，并且葡萄糖和胰島素共同培養(yǎng)存在顯著協(xié)同效應P＜0.05）。另外，5mmol/L葡萄糖和50nmol/L胰島素分別單獨培養(yǎng)對SREBP-1的核蛋白濃度及SREBP-1核蛋白與靶基因ACCα探針的結合沒有顯著影響，但當5mmol/L葡

6、萄糖和50nmol/L胰島素共同培養(yǎng)時顯著增加了他們的結合P＜0.05）。
　　 葡萄糖和胰島素單獨培養(yǎng)鵝原代肝細胞都能顯著提高細胞外TG和VLDL的濃度(P＜0.05)，同時對VLDL-TG合成與分泌相關基因的表達具有明顯誘導作用。葡萄糖和胰島素共同培養(yǎng)肝細胞，發(fā)現(xiàn)對甘油二酯?；D移酶1(DGAT1)、DGAT2、叉頭蛋白1(FoxO1)和MTTP的基因表達有顯著協(xié)同增加作用(P＜0.05)，高胰島素濃度和葡萄糖的誘導作用高于

7、低胰島素濃度和葡萄糖的作用(P＜0.05)；葡萄糖和胰島素共處理細胞對載脂蛋白B(apoB)的基因表達也有顯著協(xié)同作用(P＜0.05)，但低濃度胰島素和葡萄糖的誘導作用要高于高濃度胰島素和葡萄糖的作用(P＜0.05)；葡萄糖和胰島素共處理對細胞外TG和VLDL的濃度的誘導作用也要高于其單獨處理作用(P＜0.05)。(3)膽固醇對細胞內TG含量、細胞外TG含量、總TG含量、細胞外膽固醇濃度和VLDL濃度的調控模式與其對脂肪合成相關基因(F

8、AS、ACCα、SREBP-1、ChREBP、LXRα和SCD1及VLDL-TG組裝與分泌相關基因(DGAT2、MTTP和FoxO1)mRNA表達水平的調控模式類似。其中，10μg/mL膽固醇對以上各指標具有促進作用；20μg/mL的膽固醇的誘導作用最明顯(P＜0.05)；與20μ,g/mL的膽固醇作用相比，30μg/mL的膽固醇表現(xiàn)出了對以上各檢測指標的抑制作用(P＜0.05)。膽固醇培養(yǎng)細胞能顯著增加生酯酶FAS活性、SREBP-1

9、的核蛋白濃度及SREBP-1核蛋白與靶基因ACCα探針的結合；膽固醇對DGAT1和apoB基因表達水平的調控與對其他基因的調控不同，對DGAT1基因表達水平的調控呈現(xiàn)劑量依賴模式，對αpoB的mRNA水平?jīng)]有顯著影響(P＞0.05)。
　　 (4)LXR激活劑(T0901317)以劑量依賴方式上調細胞內TG含量和總TG含量、上調生酯酶FAS和ACC活性和與脂肪酸合成有關基因（FAS、ACCα、SREBP-1、ChREBP、LXR

10、α和SCD1）的mRNA表達，也同樣上調LPL和DGAT1基因表達水平。另外，LXR激活劑(T0901317)可以增加SREBP-1的核蛋白濃度及SREBP-1核蛋白與靶基因ACCα探針的結合；LXR激活劑(T0901317)對細胞外TG和VLDL濃度的調控模式與對MTTP、DGAT2、FoxO1和apoB基因水平的調控類似，隨著T0901317濃度的增加，誘導作用增加，當T0901317濃度達到10μmol/L時，對基因水平的誘導效果