EGFR單克隆抗體C225對鼻咽癌細胞放療增敏作用的實驗研究.pdf

1、目的：通過對鼻咽癌CNE-2z細胞株不同處理,觀察其凋亡及EGFR信號通路蛋白表達的變化,初步探索C225對鼻咽癌的放療增敏作用及其可能的相關機制。
　　 方法：
　　 1鼻咽癌CNE.2Z細胞株的EGFR表達和C225在體外細胞試驗中工作濃度的測定
　　 1.1免疫細胞化學法和Western blot法測鼻咽癌CNE-2Z細胞株EGFR的蛋白表達情況
　　 1.2 MTT法測定C225在體外細胞試驗中工

2、作濃度
　　 2 C225對鼻咽癌CNE-2Z細胞株放射敏感性的影響
　　 2.1體外培養(yǎng)克隆形成實驗觀察鼻咽癌CNE-2Z細胞株的存活分數(shù)
　　 2.2 Annexin.V/PI雙染法觀察鼻咽癌CNE-2Z細胞株凋亡的變化
　　 2.3 Western blot法觀察鼻咽癌CNE-2Z細胞株EGFR和pAkt蛋白表達的變化
　　 結(jié)果：
　　 1.1免疫細胞化學法和Western blo

3、t法測鼻咽癌CNE-2Z細胞株EGFR的表達
　　 免疫細胞化學法和Wlestern blot法檢測發(fā)現(xiàn)CNE-2Z細胞株EGFR呈高表達水平。
　　 1.2MTT法測C225工作濃度的結(jié)果
　　 生長抑制率(IC)=(對照組OD值-實驗組OD值)/對照組OD值×100％,IC50時對應的C225濃度約為25ug/mL,取其1/5即5ug/mL為C225在體外細胞試驗中的工作濃度。
　　 2.1體外培養(yǎng)克

4、隆形成實驗觀察CNE-2Z細胞株的存活分數(shù)
　　 C225聯(lián)合放療組每個劑量點細胞的存活分數(shù)明顯低于單純放療組,計算得C225聯(lián)合放療的兩組SF2分別為(0.5001±0.0324)%和(0.5032±0.0258)%,顯著低于單純放療組SF2(0.7894±0.0201)%。
　　 2.2 Annexin V/PI雙染法觀察鼻咽癌CNE-2Z細胞株凋亡的變化
　　 放療前用藥組的細胞凋亡率為(31.1±0.24

5、)%,放療后用藥組的細胞凋亡率為(32.84±0.13)%,單純放療組的細胞凋亡率為(12.5±0.60)%,單純用藥組的細胞凋亡率為(6.8±0.95)%,未處理組的細胞凋亡率為(2.84±0.51)%,放療聯(lián)合用藥組的細胞凋亡率明顯高于單純處理組和未處理組(P＜0.05,n=3)。
　　 2.3 Western blot法觀察鼻咽癌CNE-2Z細胞株EGFR和pAkt蛋白表達的變化
　　 單用C225組EGFR和pA