肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1(MALAT-1)促進乳腺癌增殖及轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、【背景】乳腺癌通常發(fā)生于乳腺上皮組織，是一種嚴重影響婦女身心健康甚至危及生命的最常見的惡性腫瘤。近年來，乳腺癌發(fā)病率在我國，尤其是發(fā)達地區(qū)，呈現(xiàn)快速增長的趨勢，已躍居女性惡性腫瘤發(fā)病率之首。隨著分子生物學研究的不斷深入，非編碼RNA在基因表達調(diào)控中的作用備受關(guān)注。研究表明，非編碼RNA參與調(diào)控腫瘤發(fā)生發(fā)展的整個過程。然而，對于非編碼 RNA的大部分研究結(jié)果都集中于siRNA、miRNA等短鏈非編碼RNA，而針對lncRNA的研究較少。M

2、ALAT-1是首個被發(fā)現(xiàn)的與腫瘤轉(zhuǎn)移潛能相關(guān)的長鏈非編碼RNA分子，其首先在高復(fù)發(fā)風險的非小細胞肺癌標本中被發(fā)現(xiàn)。隨后，在腸癌、胰腺癌、前列腺癌和肝癌等實體瘤也發(fā)現(xiàn)高表達的MALAT-1。但是，在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中，MALAT-1的作用還不完全清楚。
　　【目的】我們在臨床樣本上進行MALAT-1的表達檢測，并構(gòu)建穩(wěn)定干擾MALAT-1表達的乳腺癌細胞株 MCF-7及 MDA-MB-231，通過體外細胞實驗及體內(nèi)裸鼠皮下乳腺癌移

3、植瘤模型，研究 MALAT-1對乳腺癌 MCF-7及MDA-MB-231細胞的增殖及轉(zhuǎn)移的影響。
　　【方法】采用qRT-PCR檢測20例乳腺癌癌組織及癌旁組織標本中MALAT-1中的表達情況。同時檢測5株乳腺癌細胞中MALAT-1的表達，選擇高表達的乳腺癌細胞株MCF-7及MDA-MB-231；通過慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建穩(wěn)定干擾MALAT-1表達的MCF-7及MDA-MB-231細胞株(Lv-shMALAT-1組)及對照組Lv-shCo

4、n組)；用MTT法檢測Lv-shMALAT-1組及Lv-shCon組細胞體外增殖的變化；用流式細胞儀檢測Lv-shMALAT-1組及Lv-shCon組細胞周期的變化；克隆形成實驗檢測兩組克隆形成率的變化；劃痕實驗及Transwell遷移實驗檢測兩組細胞遷移及侵襲能力的變化；選擇8周齡Balb/c裸鼠，隨機分成2組(N=10)，兩組分別注射MDA-MB-231 Lv-shMALAT-1細胞株和 Lv-shCon細胞株，其中接種 Lv-sh

5、Con細胞株組作為對照組。裸鼠皮下乳腺癌模型構(gòu)建成功后，統(tǒng)計兩組裸鼠成瘤率及腫瘤體積變化和腫瘤的肺轉(zhuǎn)移情況。
　　【結(jié)果】1、qRT-PCR檢測結(jié)果提示 MALAT-1在乳腺癌原發(fā)灶中高表達。MALAT-1在MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S細胞株中高表達，在ZR-75-30、T47D細胞株中表達量低；2、穩(wěn)定干擾MALAT-1表達的乳腺癌細胞株MCF-7及MDA-MB-231的構(gòu)建成功；3、MTT檢測結(jié)果提

6、示，干擾MALAT-1表達后乳腺癌細胞MCF-7及MDA-MB-231細胞株體外增殖能力下降；4、干擾MALAT-1表達后乳腺癌細胞MCF-7及MDA-MB-231體外克隆形成能力顯著減弱；5、干擾MALAT-1表達可導致MCF-7及MDA-MB-231細胞阻滯于S期，同時下調(diào)了Cyclin A，Cyclin B1和CDK2，因此抑制了細胞的增殖；6、劃痕實驗及 Transwell小室侵襲實驗結(jié)果提示，干擾MALAT-1表達后，MCF-

7、7及MDA-MB-231細胞遷移和侵襲能力受到抑制，同時 MMP-2，MMP-9的表達也被下調(diào)。7、干擾 MALAT-1表達，不但影響乳腺癌細胞在裸鼠體內(nèi)成瘤率，而且能抑制裸鼠皮下乳腺腫瘤的生長，同時也抑制了乳腺癌的肺轉(zhuǎn)移。
　　【結(jié)論】我們的研究證實了，在體外實驗及裸鼠乳腺癌移植瘤模型中，干擾MALAT-1表達可抑制細胞增殖，將細胞周期阻滯于S期，從而抑制乳腺癌腫瘤的生長，并且干擾 MALAT-1表達可抑制乳腺癌細胞的轉(zhuǎn)移及侵襲