乳腺癌中MTA1和RECK的表達(dá)成負(fù)相關(guān)且均與乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān).pdf

1、乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，目前已位居女性惡性腫瘤發(fā)病率之首，嚴(yán)重危害廣大女性的健康。腫瘤的發(fā)生與發(fā)展是癌基因與抑癌基因共同參與協(xié)調(diào)的復(fù)雜過(guò)程。研究乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因?qū)θ橄侔┑脑\斷及治療有重大意義，從而提高患者的生存率，降低其死亡率。
　　轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(Metastasis-associated protein1，MTA1)是最近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，此基因一方面通過(guò)對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)

2、錄水平的調(diào)控和參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)調(diào)節(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，另一方面通過(guò)與組蛋白去乙?；附Y(jié)合，影響組蛋白乙酰化水平，來(lái)調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制，進(jìn)而參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。MTA1與多種腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)，如乳腺癌、食管癌、肝癌及卵巢癌等，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明MTA1是核小體重構(gòu)及組蛋白脫乙?；笍?fù)合物(nucleosome remodelingand histone deacety lase，NuRD)的一個(gè)亞單位，其通過(guò)對(duì)靶基因的去乙酰化作用，使

3、一些癌細(xì)胞向更具有侵襲性的表型轉(zhuǎn)化，Jang KS等人研究發(fā)現(xiàn)MTA1在乳腺癌中高表達(dá)，且與乳腺癌病理學(xué)分化差和局部微血管密度相關(guān)，我們研究也發(fā)現(xiàn)MTA1在乳腺癌組織中蛋白表達(dá)顯著升高。
　　RECK(reversion-inducing-cyste-ine-rich protein with kazalmotifs)基因是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的新型MMP抑制劑，可在轉(zhuǎn)錄后水平抑制多種MMP的表達(dá)，從而抑制腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移。RECK基因編碼

4、了長(zhǎng)度為971個(gè)氨基酸的膜蛋白，在體內(nèi)正常組織細(xì)胞內(nèi)具有較高的表達(dá)水平。研究發(fā)現(xiàn)，RECK能夠?qū)δ[瘤侵襲轉(zhuǎn)移產(chǎn)生抑制作用，乳腺癌患者乳腺組織中RECK蛋白表達(dá)水平下降，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者乳腺腫瘤組織RECK蛋白表達(dá)下降尤甚。
　　MTA1和RECK作為一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，其如何影響腫瘤轉(zhuǎn)移的確切機(jī)制，尚不十分清楚，但已有大量的研究表明，其與許多腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其基因產(chǎn)物通過(guò)參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，而成為

5、轉(zhuǎn)移過(guò)程中起正調(diào)控的重要蛋白分子。
　　目的：
　　本文通過(guò)免疫組織化學(xué)法研究乳腺癌組織中MTA1與RECK的蛋白表達(dá)關(guān)系，及其病理特征關(guān)系。明確兩者在乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移中表達(dá)的相關(guān)性。
　　方法：
　　一、材料
　　1、臨床資料
　　采用免疫組化方法檢測(cè)78對(duì)乳腺癌組織和癌旁正常乳腺組織，取自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床病理診斷中心，為2009年7月-2013年7月外科手術(shù)標(biāo)本。78對(duì)同一患者的乳腺癌

6、組織和癌旁4cm以上經(jīng)病理診斷的正常乳腺組織，包括乳腺導(dǎo)管內(nèi)原位癌15例，乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例，乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例。標(biāo)本均經(jīng)10％中性福爾馬林固定，石蠟包埋。標(biāo)本均為女性，平均年齡53.2歲（32-71歲）。乳腺癌患者標(biāo)本術(shù)前無(wú)放、化療病史。
　　2、主要試劑
　　EliVision plus試劑盒福州邁新生物科技有限公司
　　DAB Kit福州邁新生物科技有限公司
　　蘇木素染色

7、液南京建成公司
　　中性樹(shù)膠國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司
　　耐高溫塑料染色架福州邁新生物科技有限公司
　　山羊抗人MTA1多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa公司
　　RECK兔抗人單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa公司
　　二、實(shí)驗(yàn)方法
　　1、免疫組織化學(xué)技術(shù)
　　細(xì)胞經(jīng)液基處理，石蠟包埋后制成4微米連續(xù)切片。切片經(jīng)二甲苯脫蠟。梯度酒精水化后，用鏈霉素抗生物素一過(guò)氧化去酶免疫組織化學(xué)(S-P)法檢測(cè)MTA1

8、蛋白，RECK蛋白的表達(dá)。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照
　　三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理:采用貯檢驗(yàn)（不滿條件時(shí)用Fisher確切概率法）分析各組計(jì)數(shù)資料，采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析MTA1蛋白與RECK蛋白組化表達(dá)的關(guān)系，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、MTA1在乳腺癌組織中表達(dá)增加且與乳腺癌的轉(zhuǎn)移相關(guān)
　　本實(shí)驗(yàn)研究MTA1在78對(duì)乳腺癌組織和

9、癌旁正常乳腺組織中的表達(dá)，其主要表達(dá)于乳腺癌細(xì)胞胞核，部分細(xì)胞表達(dá)于胞漿，呈棕黃色顆粒。MTA1在乳腺癌中的陽(yáng)性率明顯高于癌旁正常乳腺組織，其中MTA1在乳腺癌伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，同時(shí)，MTA1的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、月經(jīng)情況、ER、PR、Her-2表達(dá)情況之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2、RECK在乳腺癌組織中表達(dá)減少且與乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)
　　本實(shí)驗(yàn)研究RECK在78對(duì)乳腺癌組織和癌

10、旁正常乳腺組織中的表達(dá)，RECK定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，主要呈散在或者片狀分布的淡黃色至黃棕色顆粒，細(xì)胞核基本不著色。RECK在正常乳腺組織中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于乳腺癌組織中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，RECK的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、月經(jīng)情況、ER、PR表達(dá)情況之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。Her-2陽(yáng)性乳腺癌RECK陽(yáng)性表達(dá)率低于Her-2陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　3、乳腺癌組織中MTA1與RE

11、CK表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)性
　　本實(shí)驗(yàn)研究78對(duì)乳腺癌組織和癌旁正常乳腺組織，發(fā)現(xiàn)MTA1高表達(dá)時(shí)RECK呈低表達(dá)水平，兩者呈負(fù)相關(guān)(r=-0.376，P＜0.05)，MTA1陽(yáng)性，RECK陰性多見(jiàn)于伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中;MTA1陰性，RECK陽(yáng)性多見(jiàn)于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中;兩者在乳腺癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性。
　　討論：
　　在女性惡性腫瘤中，乳腺癌的發(fā)病率和死亡率在全球范圍內(nèi)高居第一位。和許多實(shí)體腫瘤一樣，大多數(shù)

12、乳腺癌患者死于腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制涉及復(fù)雜的類(lèi)似“多米諾骨牌”的級(jí)聯(lián)效應(yīng)。其中第一步也是最關(guān)鍵一步是對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的破壞。腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的最重要標(biāo)志和最本質(zhì)表現(xiàn)，也是腫瘤所致患者死亡的最主要原因。腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移一直是腫瘤研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。
　　MTA1基因是于1994年由Toh等應(yīng)用差異cDNA雜交技術(shù)，首次從13762NF大鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移系統(tǒng)篩選克隆出腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MTA1，繼后在人類(lèi)高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)其對(duì)應(yīng)的人類(lèi)同

13、源物MTA1，因該基因的表達(dá)與乳腺癌轉(zhuǎn)移能力成正相關(guān)，故被命名為腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1。
　　已有大量研究證實(shí)，MTA1的高表達(dá)與許多腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)顯示MTA1在乳腺癌中的陽(yáng)性率明顯高于癌旁正常乳腺組織，其中MTA1在乳腺癌伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，同時(shí)，MTA1的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、月經(jīng)情況、ER、PR、Her-2表達(dá)情況之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　RECK是日本學(xué)者通過(guò)轉(zhuǎn)染細(xì)胞株分離所得到

14、的一種抑癌基因，定位于人9p13-p12染色體。近年的研究顯示RECK可通過(guò)抑制上皮源性腫瘤細(xì)胞分泌MMP-9從而抑制腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移及腫瘤組織中新生血管的生成。
　　在哺乳動(dòng)物體內(nèi)，RECK基因主要分為膜型和水溶型兩種，可高表達(dá)于正常的組織，但是在多種上皮源性腫瘤組織中低表達(dá)或表達(dá)缺失，包括食道癌、胃癌、膽管癌、胰腺癌、直結(jié)腸癌、非小細(xì)胞性肺癌、骨肉瘤。此外，在一些免疫系統(tǒng)疾病的病變?nèi)缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡組織中也呈低表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)顯示，

15、RECK在癌旁正常乳腺組織中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于乳腺癌組織中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，RECK的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、月經(jīng)情況、ER、PR表達(dá)情況之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Her-2陽(yáng)性乳腺癌RECK陽(yáng)性表達(dá)率低于Her-2陰性者，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　綜上所述，聯(lián)合檢測(cè)MTA1與RECK能更好的闡明乳腺癌的發(fā)病及轉(zhuǎn)移及機(jī)制，對(duì)乳腺癌的早期診斷、轉(zhuǎn)移判斷及預(yù)后預(yù)測(cè)具有一定的價(jià)值，可作為評(píng)估乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)，可有