Leptin上調(diào)乙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶2促進乳腺癌細胞增殖、侵襲及遷移.pdf

1、目的：探討瘦素（Leptin）上調(diào)乳腺癌細胞脂肪酸代謝關(guān)鍵酶表達及其對增殖、遷移及侵襲能力的影響，探討其可能的分子機制，以期從脂代謝視角，豐富乳腺癌發(fā)病機理和發(fā)現(xiàn)新的治療靶點提供實驗依據(jù)。
　　方法：⑴采用蛋白印跡法(Western Blot， WB)和免疫熒光法(immunofluorescence, IF)檢測乳腺癌細胞株 MCF-7，T47D的 Leptin長、短受體(Ob-Rb, Ob-Rt)的表達，CCK-8試驗檢測Le

2、ptin對乳腺癌細胞增殖能力的影響，劃痕試驗和Transwell試驗檢測乳腺癌細胞侵襲及遷移能力的變化。⑵實時熒光定量 PCR芯片(real-time fluorescence quantitative PCR array，QRT-PCR array)檢測Leptin作用乳腺癌細胞株MCF-7后的基因表達譜差異，并篩選出表達差異較大的候選基因乙酰輔酶 A轉(zhuǎn)移酶2（ACAT2)，采用Western Blot和QRT-PCR驗證ACAT2蛋

3、白和基因水平變化。⑶采用ACAT2特異性抑制劑PPPA(Pyripyropene A)作用乳腺癌細胞株MCF-7、T47D，觀察Leptin對兩株乳腺癌細胞增殖能力、侵襲和遷移能力的影響；Western Blot檢測Leptin對兩株乳腺癌細胞增殖相關(guān)的標(biāo)志分子(C-myc、Cylind1)表達的影響。⑷采用JAK/STAT3，MAPK/ERK，PI3K/AKT信號通路抑制劑處理乳腺癌細胞株MCF-7，T47D，通過檢測兩株乳腺癌細胞A

4、CAT2及其轉(zhuǎn)錄因子SREBP2表達的變化，探討Leptin作用乳腺癌細胞的相關(guān)信號通路和可能的分子機制。
　　結(jié)果：①WB和IF結(jié)果表明，乳腺癌細胞株MCF-7，T47D均表達Ob-Rb, Ob-Rt；CCK8試驗結(jié)果顯示，Leptin處理后乳腺癌細胞數(shù)目明顯增多(p<0.05)，表明 Leptin能夠明顯增強乳腺癌細胞的增殖能力；劃痕試驗結(jié)果顯示，Leptin處理組細胞愈合能力較對照組明顯增強(p<0.05)，表明Leptin

5、促進細胞遷移；Transwell試驗結(jié)果顯示，Leptin處理后穿膜細胞數(shù)增多，表明Leptin能夠促進乳腺癌細胞侵襲(p<0.05)。②QRT-PCR array結(jié)果顯示，與對照組相比，Leptin處理MCF-7細胞后ACAT2基因表達明顯上調(diào)(p<0.05);QRT-PCR及WB驗證結(jié)果表明，Leptin所致MCF-7，T47D細胞中ACAT2的表達明顯升高，且呈時間濃度依賴性。③細胞中ACAT2活性被特異性抑制劑PPPA抑制后，C

6、CK8試驗、劃痕試驗及Transwell試驗結(jié)果顯示，Leptin促MCF-7，T47D細胞增殖、遷移及侵襲作用均被抑制，乳腺癌細胞增殖相關(guān)標(biāo)志分子 C-myc和Cylind1表達也被明顯抑制。④阻斷PI3K/AKT信號通路后，Leptin促進ACAT2和SREBP2蛋白表達作用被抑制；阻斷 JAK/STAT3和 MAPK/ERK信號通路則對Leptin上調(diào)ACAT2和SREBP2蛋白表達作用無影響。
　　結(jié)論：⑴Leptin促進