AMPK--mTOR通路在錳誘導(dǎo)PC12細(xì)胞自噬中的作用研究.pdf

1、目的:自噬是真核細(xì)胞中降解長(zhǎng)壽命蛋白和調(diào)節(jié)細(xì)胞器代謝的主要機(jī)制，受到多種信號(hào)通路的調(diào)控。本研究以錳誘導(dǎo)PC12細(xì)胞建立錳中毒性帕金森綜合征體外細(xì)胞模型，探討AMPK-mTOR信號(hào)通路在錳誘導(dǎo)PC12細(xì)胞自噬中的作用，為錳中毒性帕金森綜合征的發(fā)病機(jī)制及藥物研究提供思路。
　　方法:根據(jù)不同濃度及不同作用時(shí)間錳對(duì)PC12細(xì)胞存活率的影響，選擇合適的錳濃度及作用時(shí)間，建立錳中毒性帕金森綜合征體外細(xì)胞模型，再給予Compound C進(jìn)行干

2、預(yù):CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率，透射電子顯微鏡觀察PC12細(xì)胞經(jīng)錳處理后的超微結(jié)構(gòu)變化，分子水平檢測(cè)自噬標(biāo)記蛋白LC3及AMPK-mTOR通路關(guān)鍵蛋白p-AMPK、p-mTOR、p-4E-BP1、p-p70S6K的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:1、PC12細(xì)胞在不同錳濃度下分別作用24h、48h、72h，用CCK-8法檢測(cè)計(jì)算細(xì)胞存活率，染錳組與對(duì)照組間比較，P＜0.01，不同染錳組間比較，P＜0.01，同一染錳組在不同時(shí)間點(diǎn)間比較，P＜

3、0.01，差異均具有顯著性。2、PC12細(xì)胞按Control組、Mn組、CC組、Mn+CC組分別加藥處理24h，CCK-8法檢測(cè)計(jì)算Control組細(xì)胞存活率為(100.00±0)％，Mn組、CC組、Mn+CC組細(xì)胞存活率均較Control組下降，P＜0.01，差異有顯著性，而Mn組與Mn+CC組相比，Mn+CC組細(xì)胞存活率較大，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、PC12細(xì)胞經(jīng)錳處理后，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表達(dá)量增加，呈濃度和時(shí)間依

4、賴性(P＜0.01)。4、透射電子顯微鏡下可見染錳組細(xì)胞內(nèi)自噬體及自噬溶酶體增加。5、與對(duì)照組相比，Mn組PC12細(xì)胞中p-AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯增多(P＜0.01)，p-mTOR、p-p70S6K、p-4E-BP1蛋白的相對(duì)表達(dá)量顯著減少(P＜0.01);而Mn+CC組中p-AMPK、p-mTOR、p-p70S6K、p-4E-BP1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表達(dá)量均介于Control組與Mn組之間(P＜0