MPP+通過(guò)mTOR信號(hào)通路下調(diào)PC12細(xì)胞的自噬活性.pdf

1、碩士學(xué)位論文論文題目MPP通過(guò)mT信號(hào)通路下調(diào)PC12細(xì)胞的自噬活性研究生姓名杜建紅指導(dǎo)教師姓名張正春專業(yè)名稱神經(jīng)病學(xué)研究方向腦血管病基礎(chǔ)與臨床論文提交日期2013年5月MPP通過(guò)mT信號(hào)通路下調(diào)PC12細(xì)胞的自噬活性中文摘要IMPP通過(guò)mT信號(hào)通路下調(diào)PC12細(xì)胞的自噬活性中文摘要目的：1.觀察不同濃度及不同時(shí)間點(diǎn)的MPP對(duì)PC12細(xì)胞的存活率的影響，確定PD（Parkinson’sdisease）細(xì)胞模型的合適濃度及時(shí)間范圍；2.觀

2、察MPP對(duì)PC12細(xì)胞的存活率、LDH漏出率及自噬溶酶體途徑相關(guān)蛋白LC3II、Beclin1的表達(dá)水平的影響，并觀察雷帕霉素(Rapamycin，RAPA)的拮抗作用；3.觀察MPP對(duì)自噬上游調(diào)控蛋白mT（哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白）及其信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平影響，并觀察RAPA的作用。方法：根據(jù)不同濃度及作用不同時(shí)間MPP對(duì)PC12細(xì)胞活性的影響，選擇合適的MPP處理濃度及時(shí)間，利用PC12細(xì)胞經(jīng)過(guò)MPP處理制作帕金森模型，再給予R

3、APA進(jìn)行干預(yù)：MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，LDH試劑盒檢測(cè)上清液中的LDH活性，Westernblot技術(shù)分析LC3II、Beclin1、mT、Rapt、Rict、pp70s6k、p4EBP1蛋白表達(dá)水平的變化，探討MPP調(diào)節(jié)PC12細(xì)胞自噬活性的機(jī)制。結(jié)果：1.PC12細(xì)胞相對(duì)存活率隨MPP濃度梯度呈降低趨勢(shì)，MPP濃度在0.25～3.0mM范圍內(nèi)細(xì)胞相對(duì)存活率顯著下降（P0.05～0.001）；PC12細(xì)胞相對(duì)存活率隨MPP時(shí)間梯度呈

4、降低趨勢(shì)，在8～48h范圍內(nèi)細(xì)胞相對(duì)存活率顯著下降（P0.05～0.001）；2.MPP處理PC12細(xì)胞24h，細(xì)胞相對(duì)存活率顯著降低（P0.001），上清液中LDH漏出率顯著升高（P0.001），LC3II的表達(dá)顯著受抑（P0.01），Beclin1的表達(dá)顯著受抑（P0.01），RAPA干預(yù)后有效提高了細(xì)胞相對(duì)存活率（P0.001），降低上清液中LDH活力（P0.001），顯著上調(diào)了LC3II的表達(dá)（P0.01）和Beclin1的表達(dá)