AMPK-mTOR信號通路對自噬的影響在小鼠局灶性腦缺血損傷中的作用.pdf

1、目的：
　　觀察小鼠永久性局灶性腦缺血損傷后大腦缺血半球皮層內(nèi)單磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated potein kinase，AMPK)、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）表達的時向變化及對自噬相關蛋白LC3和Beclin-1表達的影響。探討抑制AMPK活性在小鼠缺血性腦損傷的作用和機制。
　　方法：
　　選取健康成年雄性Balb/c小鼠，隨機

2、分為假手術組、溶媒對照組和藥物干預組。溶媒對照組和藥物干預組采用線栓法制作永久性大腦中動脈閉塞(permanent middle cerebral artery occlusion，pMCAO）模型，藥物干預組于缺血時立即腹腔注射AMPK抑制劑Compound C(20mg/kg)，溶媒對照組和假手術組于同時間注射等劑量溶媒（生理鹽水+DMSO）。各組小鼠于術后3h、6h、12h和24h時間點取患側(cè)皮層，采用Western blot法和

3、免疫組化法檢測AMPK、mTOR、p-AMPK、p-mTOR、LC3、Beclin-1的表達情況。以行為學癥狀、腦水腫、腦梗死體積和尼氏小體數(shù)量評價抑制AMPK活性對小鼠缺血性腦損傷的影響。
　　結(jié)果：
　　Western blot及免疫組化結(jié)果顯示，假手術組小鼠大腦半球皮層內(nèi)p-AMPK的表達水平較低，溶媒組小鼠pMCAO后，大腦缺血半球皮層內(nèi)p-AMPK的表達在短期內(nèi)迅速增加，3h為峰值，6h表達下降，但表達水平仍高，與

4、假手術組相比有統(tǒng)計學意義（p<0.01），12h和24h持續(xù)降低；p-AMPK與LC3、Beclin-1表達趨勢一致，與p-mTOR表達趨勢相反。用Compound C處理后，Compound C組較溶媒組小鼠大腦缺血半球皮層內(nèi)p-AMPK表達水平明顯降低，同時LC3、Beclin-1表達降低，p-mTOR表達升高（p<0.05）；小鼠腦缺血各時間點尼氏小體數(shù)量缺失減輕。腦缺血24h后，藥物干預組較溶媒對照組神經(jīng)功能評分改善，腦水腫減輕