MTA1在前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　 惡性腫瘤導(dǎo)致病人死亡的主要原因是瘤細(xì)胞的播散及廣泛轉(zhuǎn)移，抑制和阻斷腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是成功治療惡性腫瘤的關(guān)鍵所在。因此對(duì)惡性腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究是多年來(lái)研究的熱點(diǎn)。MTA1(metastasis associated gene 1)是已知與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)、具有去乙酰活性的分子。有研究證明腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(MTA1)在轉(zhuǎn)移性前列腺癌中選擇性高表達(dá)，但是缺乏相關(guān)分子機(jī)制的研究。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)前列腺癌高低轉(zhuǎn)移配對(duì)細(xì)胞株

2、PC-3M-1E8和PC-3M-2B4中MTA1的表達(dá)水平進(jìn)行正反兩個(gè)方面的干預(yù)，在體外細(xì)胞水平上研究MTA1對(duì)前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，探討其中可能的分子機(jī)制，為前列腺癌的基因靶向治療提供新的治療靶點(diǎn)。
　　 方法：
　　 通過(guò)RT-PCR檢測(cè)高低轉(zhuǎn)移配對(duì)細(xì)胞株P(guān)C-3M-1E8和PC-3M-2B4中MTA1mRNA的表達(dá)情況；選擇低表達(dá)MTA1細(xì)胞株2B4進(jìn)行MTA1正義轉(zhuǎn)染，經(jīng)G418篩選出穩(wěn)定表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞克隆

3、；同時(shí)選擇高表達(dá)MTA1細(xì)胞株1E8進(jìn)行siRNA反義干預(yù)；利用Western blot分別驗(yàn)證轉(zhuǎn)染和干預(yù)前后蛋白水平的變化；通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲運(yùn)動(dòng)的改變；共聚焦顯微鏡成像觀察細(xì)胞骨架的變化；黏附實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞黏附能力的改變。
　　 結(jié)果：
　　 1、MTA1在高低轉(zhuǎn)移前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3M-1E8和PC-3M-2B4中表達(dá)差異明顯，在1E8中表達(dá)強(qiáng)度明顯高于2B4。
　　 2、正義

4、轉(zhuǎn)染和反義干預(yù)后通過(guò)Western blot的方法驗(yàn)證MTA1蛋白水平的變化，有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明MTA1成功轉(zhuǎn)染至1E8細(xì)胞、siRNA反義干預(yù)2B4效率明顯。
　　 3、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell說(shuō)明MTA1能明顯增強(qiáng)細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移運(yùn)動(dòng)能力。
　　 4、Confocol發(fā)現(xiàn)MTA1能使骨架極性增強(qiáng)和微管微絲聚集。
　　 5、黏附實(shí)驗(yàn)說(shuō)明MTA1可以抑制細(xì)胞間的黏附。
　　 結(jié)論：
　　

5、在前列腺癌高低轉(zhuǎn)移潛能配對(duì)細(xì)胞株中，采用基因轉(zhuǎn)染和RNA干預(yù)技術(shù)相結(jié)合，通過(guò)侵襲轉(zhuǎn)移、骨架染色、黏附等實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了MTA1在侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。結(jié)果顯示，隨MTA1的表達(dá)增高，前列腺癌細(xì)胞的侵襲能力明顯增強(qiáng)，同時(shí)反義干預(yù)后侵襲能力可以得到逆轉(zhuǎn)；并且我們發(fā)現(xiàn)MTA1與細(xì)胞的黏附能力成負(fù)相關(guān)，此結(jié)論在以往有關(guān)前列腺癌的研究中未見(jiàn)報(bào)道。細(xì)胞黏附能力通常由多種黏附分子共同調(diào)控，MTA1與黏附分子之間的關(guān)系有待進(jìn)一步的深入研究。在以往的研究中，雖已通