替比夫定對HepG2腫瘤干細胞標記分子CD133、AFP的影響及其生物學(xué)意義的研究.pdf

1、目的：
　　探討替比夫定對肝癌細胞株HepG2細胞腫瘤干細胞標志分子CD133和甲胎蛋白（AFP）的影響，以發(fā)現(xiàn)核苷類藥物治療肝癌患者的分子生物學(xué)機制，為肝癌的綜合治療提供新的實驗數(shù)據(jù)和理論根據(jù)。
　　方法：
　　本研究以HepG2細胞為實驗細胞，實驗分為兩組：實驗組（替比夫定組）和對照組。細胞培養(yǎng)至細胞80％鋪滿培養(yǎng)瓶時，實驗組給予含替比夫定（10umol/L）的細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)，對照組僅給予細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)。隔天更換細

2、胞培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)細胞9天，收集細胞。
　　1）1×107細胞/ml被用于流式細胞儀雙染法檢測HepG2細胞表面CD133的表達：
　　2）1×107細胞/ml被用于化學(xué)發(fā)光免疫檢測細胞內(nèi)AFP含量;
　　3)1×107細胞/ml被用于實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-Time PCR）檢測細胞內(nèi)CD133和AFP的表達。
　　結(jié)果：
　　1.流式細胞儀檢測顯示，替比夫定組和對照組的CD133陽性細胞的表

3、達率分別為1.9%±0.04和0.83%±0.02，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)卡方檢驗，兩組間存在顯著性差異（P<0.05），提示替比夫定處理使HepG2細胞表面腫瘤干細胞標志分子CD133表達減少。
　　2.Real-time PCR檢測，替比夫定組和對照組HepG2細胞CD133 mRNA的表達分別為0.609士0.057、0.956士0.132，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)t檢驗，兩組間存在明顯差別（P<0.05）。
　　3.兩組細胞在6孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)3天

4、后，取細胞裂解液，采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法，測得兩組細胞內(nèi)AFP的數(shù)值分別為：180.32士3.92、149.07士3.57，t檢驗顯示，兩組間HepG2細胞內(nèi)AFP的表達差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。
　　4.兩組細胞培養(yǎng)9天后，同樣細胞數(shù)的細胞獲取總RNA，分別取20ng/ul RNA用于Real-time PCR檢測，替比夫定組和對照組AFP表達分別為1.061士0.034、2.507士1.379，t檢驗顯示，兩組間有