替比夫定對(duì)HepG2腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記分子CD133、AFP的影響及其生物學(xué)意義的研究.pdf

1、目的：
　　探討替比夫定對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志分子CD133和甲胎蛋白（AFP）的影響，以發(fā)現(xiàn)核苷類藥物治療肝癌患者的分子生物學(xué)機(jī)制，為肝癌的綜合治療提供新的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論根據(jù)。
　　方法：
　　本研究以HepG2細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分為兩組：實(shí)驗(yàn)組（替比夫定組）和對(duì)照組。細(xì)胞培養(yǎng)至細(xì)胞80％鋪滿培養(yǎng)瓶時(shí)，實(shí)驗(yàn)組給予含替比夫定（10umol/L）的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)，對(duì)照組僅給予細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)。隔天更換細(xì)

2、胞培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞9天，收集細(xì)胞。
　　1）1×107細(xì)胞/ml被用于流式細(xì)胞儀雙染法檢測(cè)HepG2細(xì)胞表面CD133的表達(dá)：
　　2）1×107細(xì)胞/ml被用于化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)AFP含量;
　　3)1×107細(xì)胞/ml被用于實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-Time PCR）檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)CD133和AFP的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，替比夫定組和對(duì)照組的CD133陽性細(xì)胞的表

3、達(dá)率分別為1.9%±0.04和0.83%±0.02，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)卡方檢驗(yàn)，兩組間存在顯著性差異（P<0.05），提示替比夫定處理使HepG2細(xì)胞表面腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志分子CD133表達(dá)減少。
　　2.Real-time PCR檢測(cè)，替比夫定組和對(duì)照組HepG2細(xì)胞CD133 mRNA的表達(dá)分別為0.609士0.057、0.956士0.132，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)，兩組間存在明顯差別（P<0.05）。
　　3.兩組細(xì)胞在6孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)3天

4、后，取細(xì)胞裂解液，采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法，測(cè)得兩組細(xì)胞內(nèi)AFP的數(shù)值分別為：180.32士3.92、149.07士3.57，t檢驗(yàn)顯示，兩組間HepG2細(xì)胞內(nèi)AFP的表達(dá)差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。
　　4.兩組細(xì)胞培養(yǎng)9天后，同樣細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞獲取總RNA，分別取20ng/ul RNA用于Real-time PCR檢測(cè)，替比夫定組和對(duì)照組AFP表達(dá)分別為1.061士0.034、2.507士1.379，t檢驗(yàn)顯示，兩組間有