CD133陽性骨肉瘤細胞的獲取及其腫瘤干細胞特性的初步鑒定.pdf

1、研究背景：
　　骨肉瘤是最常見的骨原發(fā)性惡性腫瘤，好發(fā)于青少年[1]，惡性程度高，極易發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，約80％患者在首次診斷時已發(fā)生了肺部轉(zhuǎn)移，這類患者應用傳統(tǒng)的外科手術治療后，5年生存率僅為10-20％，大部分患者在2年內(nèi)因肺轉(zhuǎn)移死亡[2,3]。盡管近年來骨肉瘤患者經(jīng)過綜合治療后預后得到明顯改善，但5年生存率仍只有約40~60%[4]。骨肉瘤的預后容易受轉(zhuǎn)移影響，僅有20-30%的骨肉瘤患者出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移后應用全身化療和局部行轉(zhuǎn)移瘤切除

2、術后能夠獲得長期生存[5]。腫瘤干細胞（cancer stem cells，CSCs）理論認為，腫瘤組織中存在一些干細胞樣細胞，它們數(shù)目極少，具有很強細胞增殖、遷移和侵襲能力，具有自我更新和無限分化的能力，是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、復發(fā)、轉(zhuǎn)移和耐藥的根源[6-8]。沒有針對這一類具有腫瘤發(fā)生能力的腫瘤干細胞進行治療是目前腫瘤治療失敗的原因。缺乏鑒定腫瘤干細胞的可靠標志物，以及對腫瘤干細胞的生物學行為和轉(zhuǎn)歸的認識是制約發(fā)展針對腫瘤干細胞的靶向治療

3、的主要原因[8,9]。CD133已在神經(jīng)膠質(zhì)瘤、結(jié)腸癌、肝癌、黑色素瘤、滑膜肉瘤等腫瘤組織中證實是一種腫瘤干細胞標記物[9,10]，對于CD133可否作為骨肉瘤干細胞的標志物，目前尚存在較大的爭議[4]。
　　目的：
　　通過磁珠分選獲得骨肉瘤CD133陽性細胞，檢測CD133陽性細胞亞群的生物學特性，明確CD133作為骨肉瘤干細胞表面標志物的臨床意義。
　　方法：
　　用免疫磁珠分選法分離人骨肉瘤細胞株MG-6

4、3中的CD133陽性細胞亞群，應用流式細胞學分析、western blot分析和免疫熒光染色測定CD133陽性細胞亞群的CD133蛋白表達情況，應用CCK-8法、平板集落形成試驗、球囊形成實驗、劃痕試驗及Transwell侵襲小室試驗，研究CD133陽性細胞亞群的生物學特性。
　　結(jié)果：
　　本研究成功地從MG-63中獲得CD133陽性細胞亞群，流式細胞學分析、免疫熒光染色和Western blot分析均顯示該細胞群中高表達

5、CD133蛋白（純度約為90-95%）。與CD133陰性細胞亞群相比，CD133陽性細胞亞群的增殖能力（p<0.05）、平板集落形成能力（p=0.02）、遷移能力（p=0.03）及侵襲能力（p=0.03），且CD133陽性細胞在無血清培養(yǎng)基中能形成球囊，而CD133陰性細胞卻不能，而是最終死亡。
　　結(jié)論：
　　人骨肉瘤細胞株MG-63中存在腫瘤干細胞樣細胞，CD133陽性細胞具有腫瘤干細胞特性，CD133可能是骨肉瘤的腫瘤