干細(xì)胞表面標(biāo)志CD133在肝癌組織中的表達(dá)及其陽(yáng)性亞群增殖特性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、最新的腫瘤干細(xì)胞理論認(rèn)為，腫瘤的生長(zhǎng)是腫瘤組織中極少量具無(wú)限增殖潛能的腫瘤干細(xì)胞惡性增殖的結(jié)果，這些腫瘤干細(xì)胞具有自我更新和分化潛能，是形成不同分化程度的腫瘤細(xì)胞、腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源，在啟動(dòng)腫瘤形成和維持其生長(zhǎng)中發(fā)揮重要作用。目前已經(jīng)在多種惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)有腫瘤干細(xì)胞的存在，例如白血病、乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌。根據(jù)腫瘤干細(xì)胞學(xué)說(shuō)，腫瘤干細(xì)胞與干細(xì)胞在許多方面具有相似之處，決定腫瘤的起始和增殖。因此，分離和鑒定腫瘤干細(xì)胞對(duì)闡

2、明腫瘤的發(fā)病機(jī)理，揭示腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的機(jī)制具有重要的意義，并能為腫瘤的治療提供新的策略。
　　原發(fā)性肝癌是我國(guó)常見(jiàn)的腫瘤之一，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是患者死亡的主要原因之一。對(duì)肝癌的發(fā)病機(jī)理的研究表明，肝臟中具有肝祖細(xì)胞特性的卵圓細(xì)胞參與了肝癌的發(fā)生，另外肝癌組織的異質(zhì)性表明，并不是每個(gè)肝癌細(xì)胞都具有形成腫瘤的能力，這提示肝癌組織中可能存在具有表型和功能特殊的細(xì)胞，分離和鑒定這群細(xì)胞是否具有干細(xì)胞特性對(duì)闡明肝癌的發(fā)病機(jī)理具有重要意義。

3、　　目前，眾多實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)肝干細(xì)胞廣泛參與肝癌的發(fā)生、發(fā)展，因此，尋找肝干細(xì)胞特異性的表面分子成為研究的關(guān)鍵。以CD133分子為標(biāo)志成功的在多個(gè)腫瘤細(xì)胞系中分離出腫瘤干細(xì)胞。此外，在大鼠部分肝切除模型中發(fā)現(xiàn)CD133被重新激活，表明CD133與肝細(xì)胞的增殖密切相關(guān)。因此，以CD133為表面標(biāo)志的肝癌干細(xì)胞的研究對(duì)揭示肝癌的惡性增殖、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的機(jī)制，最終闡明肝癌的發(fā)病機(jī)制具有重要意義，并為肝癌的治療提供新的思路和策略。
　　目的：

4、
　　1．檢測(cè)干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD133在肝癌組織中的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系，初步探討其與預(yù)后的相關(guān)性；
　　2．觀察純化的CD133腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)、體外生物學(xué)特性，進(jìn)一步探討肝癌細(xì)胞系中CD133陽(yáng)性亞群的增殖特性。
　　方法：
　　1．采用免疫組織化學(xué)Envision二步法檢測(cè)52例臨床肝細(xì)胞癌組織中CD133及Ki-67的表達(dá),對(duì)照組為正常肝組織6例，并與臨床病理學(xué)指標(biāo)和術(shù)后生存率進(jìn)行比較分析；
　

5、　2．流式細(xì)胞熒光激活分選技術(shù)檢測(cè)肝癌細(xì)胞系Huh-7中CD133的表達(dá)；
　　3．體外培養(yǎng)并觀察其增殖、成瘤及分化能力。
　　結(jié)果：
　　1．在52例肝癌組織中，CD133的平均染色強(qiáng)度為1.07±0.32，Ki-67在肝癌組織陽(yáng)性表達(dá)率為57.7％，但正常肝組織未見(jiàn)CD133及Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)；
　　2．CD133、Ki-67的表達(dá)和肝癌的病理分化程度（P＜0.05）、臨床分期（P＜0.05）密切相關(guān)，但

6、與患者年齡、性別、腫瘤的大小無(wú)關(guān)；
　　3．32例肝癌患者的完整的隨訪資料表明，CD133表達(dá)陽(yáng)性患者的5年生存率為28.7％，中位生存時(shí)間為34.2月，陰性表達(dá)患者5年生存率為44.8％，中位生存期時(shí)間為45.4月，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)；
　　4．流式細(xì)胞儀檢測(cè)肝癌細(xì)胞系Huh-7中有62.3％的細(xì)胞呈CD133陽(yáng)性表達(dá)，體外培養(yǎng)顯示CD133陽(yáng)性亞群增殖能力強(qiáng)于陰性細(xì)胞亞群；
　　5．CD133陽(yáng)