攜帶CTTNBP2NL基因的重組腺病毒的抗癌研究.pdf

1、隨著生活壓力增大，環(huán)境污染加劇，惡性腫瘤的發(fā)病率越來越高，所以尋找一種高效治療方法已成為近年的研究重點。CTTNBP2NL(CTTNBP2N-terminallike)編碼的蛋白為N末端樣皮肌動蛋白結(jié)合蛋白2，與CTTNBP2同源，在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)生過程中起重要作用。又因為腺病毒在病毒療法中具有穩(wěn)定性好，宿主范圍廣，使用安全的優(yōu)點。
　　本研究將CTTNBP2NL基因插入到腺病毒載體上，構(gòu)建了非復制型重組腺病毒Ad-CTTNBP2N

2、L。利用MTT法檢測重組病毒對不同癌細胞系增殖有抑制作用。結(jié)晶紫實驗觀察到重組腺病毒對癌細胞有很好的殺傷效果。通過Hoechst33258染色和流式細胞術實驗分析攜帶CTTNBP2NL基因的重組腺病毒可以誘導細胞凋亡。轉(zhuǎn)染pEGFP-LC3-C1到癌細胞后，感染重組病毒檢測癌細胞沒有自噬。Western blot檢測細胞內(nèi)凋亡相關蛋白及自噬相關蛋白的表達量，證明CTTNBP2NL基因通過凋亡途徑誘導癌細胞死亡。本實驗為將CTTNBP2N

3、L基因運用到癌癥的治療上提供了一定的理論基礎。在海洋自然資源中，海洋凝集素在治療癌癥方面具有很大的潛力。其中UPL1（Ulvapertusa lectin1）能夠?qū)t細胞起凝集作用，具有研究價值。本實驗在已有的研究基礎上對UPL1和細胞信號通路之間相互作用的關系做了進一步的探究。通過IP檢測UPL1與PRMT5（精氨酸N端甲基化轉(zhuǎn)移酶5）、β-Tubulin、β-Actin的相互作用。利用激光共聚焦顯微鏡觀察UPL1和MEP50WD(W

4、DR77)的亞細胞定位。Western blot分別檢測感染了復制缺陷型腺病毒Ad-UPL1的BEL-7404、Huh7細胞系中ERK、p-ERK、Akt、p38、p-p38、STAT、p-STAT、ISG15的表達量，以及自噬相關蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ的表達。EBSS饑餓處理誘導凋亡后，檢測UPL1對癌細胞的存活率的影響。利用U0126（MEK抑制劑）、SB203580(p38抑制劑)、LY294002（PI3K抑制劑）分別處