人源miR-185通過(guò)靶向惡性瘧原蟲(chóng)var基因減弱感染紅細(xì)胞粘附作用的研究.pdf

1、瘧疾是經(jīng)按蚊叮咬而感染瘧原蟲(chóng)所引起的傳染病，嚴(yán)重危害人類健康。能感染人的瘧原蟲(chóng)有5種，其中惡性瘧原蟲(chóng)的毒力最強(qiáng)，致死率最高。
　　紅內(nèi)期惡性瘧原蟲(chóng)寄生于人成熟紅細(xì)胞中，這導(dǎo)致它們之間存在錯(cuò)綜復(fù)雜的相互作用關(guān)系。microRNAs是種廣泛存在于真核生物中的長(zhǎng)度～22nt的單鏈非編碼RNA,其在細(xì)胞質(zhì)中與Dicer、Argonaute(AGO)等蛋白形成復(fù)合物而誘導(dǎo)基因沉默，主要通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與靶基因mRNA的UTR或者CDS結(jié)合，

2、使靶mRNA脫腺苷化、降解和抑制翻譯。最近，LaMonte等人的研究顯示宿主miRNA-451和let-7i移位到紅內(nèi)期惡性瘧原蟲(chóng)蟲(chóng)體中，與惡性瘧原蟲(chóng)PKA-R轉(zhuǎn)錄本發(fā)生嵌合來(lái)抑制調(diào)節(jié)性PKA亞基的翻譯，進(jìn)而抑制蟲(chóng)體的生長(zhǎng);同樣，在鼠中，發(fā)現(xiàn)鼠的miR-155能夠增強(qiáng)小鼠對(duì)瘧原蟲(chóng)的免疫力;在岡比亞按蚊中，岡比亞按蚊的aga-miR-305能夠提高岡比亞按蚊對(duì)瘧疾蟲(chóng)的免疫力。這些研究結(jié)果都表明宿主microRNAs能對(duì)瘧原蟲(chóng)基因進(jìn)行調(diào)控來(lái)

3、對(duì)抗瘧疾。
　　人miR-185是本實(shí)驗(yàn)室在惡性瘧原蟲(chóng)3D7里發(fā)現(xiàn)的宿主miRNA之一，且含量很高，通過(guò)預(yù)測(cè)得知其和var(pfl1955w)的dbl序列靶向互補(bǔ)，提示人miR-185可能調(diào)控惡性瘧原蟲(chóng)var基因和功能。有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道稱，人miR-185在對(duì)腫瘤和代謝性疾病的調(diào)控起重要作用，如miR-185負(fù)向調(diào)控雄激素受體抑制前列腺癌細(xì)胞;miR-185靶向原癌基因Six1抑制腫瘤的生長(zhǎng)，靶向SOCS3基因抑制糖尿病功能紊亂等等

4、。
　　為了探討人miR-185對(duì)惡性瘧原蟲(chóng)var(pfl1955w)基因表達(dá)調(diào)控并觀察感染紅細(xì)胞粘附所受到的影響，我們體外培養(yǎng)293T細(xì)胞和惡性瘧原蟲(chóng)3D7，構(gòu)建雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒和表達(dá)質(zhì)粒，再分別用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞和Cytomix電轉(zhuǎn)到惡性瘧原蟲(chóng)3D7，流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，用雙熒光素酶報(bào)告驗(yàn)證人miR-185對(duì)var(pfl1955w)的dbl區(qū)域直接調(diào)控作用，Q-PCR檢測(cè)var(pfl

5、1955w)mRNA的表達(dá)，細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)感染紅細(xì)胞的粘附。
　　結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞和惡性瘧原蟲(chóng)3D7的效率在50％以上;過(guò)表達(dá)人miR-185可顯著抑制含var(pfl1955w) dbl的熒光素酶基因的表達(dá)(p＜0.001);在293T細(xì)胞和惡性瘧原蟲(chóng)3D7中，過(guò)表達(dá)人miR-185能夠減少var(pfl1955w)mRNA的含量(p＜0.05)，并使感染紅細(xì)胞粘附作用下降了39％。綜上表明，人miR-185對(duì)瘧原蟲(chóng)