AG490對甲狀腺髓樣癌TT細胞放射敏感性的研究.pdf

1、目的:
　　甲狀腺髓樣癌（medullary thyroid carcinoma,MTC）是起源于甲狀腺濾泡旁分泌細胞的惡性腫瘤。甲狀腺濾泡旁分泌細胞不能吸收碘，而且對射線不敏感，因此放射治療在該疾病治療中起著極微療效。本文通過對AG490干預下，甲狀腺髓樣癌TT細胞體外培養(yǎng)的情況進行研究，探討AG490在阻斷JAK-STAT信號通路及增加放射敏感性中的作用，為臨床上更有效的治療甲狀腺髓樣癌提供一定的理論基礎。
　　方法:<

2、br>　　1.MTT法檢測甲狀腺髓樣癌TT細胞在遞增濃度：0、25、50、100μmol/L AG490干預下第1、2、3、4、5d不同時間點的吸光度值，以判斷細胞增殖情況。
　　2.流式細胞檢測技術檢測甲狀腺髓樣癌TT細胞在遞增濃度0、25、50、100μmol/L AG490干預48h后細胞的凋亡情況。
　　3.Western blot法檢測甲狀腺髓樣癌TT細胞在不同濃度AG490干預24h后，JAK2、p-STAT3、

3、Bcl-2和Bax蛋白的表達情況。
　　4.以50μmol/L濃度 AG490的培養(yǎng)基體外培養(yǎng)甲狀腺髓樣癌TT細胞作為實驗組，以不含AG490的普通培養(yǎng)基作為對照組對細胞進行培養(yǎng)。細胞貼壁后，采用0、2、4、6、8、10Gy的遞增單吸收劑量進行照射，24h后顯微鏡下計數(shù)，計算克隆接種率(planting efficiency,PE)、存活分數(shù)(survival fraction,SF)，并采用GraphPad Prism5軟件擬合

4、細胞存活曲線。根據(jù)細胞存活曲線計算相關放射生物學參數(shù)射線為2Gy時的存活分數(shù)（SF2）、平均致死劑量（D0）、準閾劑量（Dq）、外推數(shù)（N）、D0時放射增敏比（SER D0）和Dq時放射增敏比（SERDq）等參數(shù)。
　　5.對甲狀腺髓樣癌TT細胞采取0、25、50、100μmol/L的AG490進行干預，并采取4Gy劑量進行照射，通過western blot實驗和Quantity one軟件測定每組細胞JAK2和p-Stat3含量

5、。
　　結果:
　　增殖率檢測：與0μmol/L相比，25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L組均可見TT細胞受到一定程度的抑制，隨著濃度的增加、時間的延長，AG490對甲狀腺髓樣癌TT細胞的抑制作用逐漸增大。凋亡率檢測顯示：0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L濃度組細胞凋亡率分別為4.86±0.79％、15.24±1.00%、33.11±2.40%、64.47±2.29%。凋

6、亡率隨著AG490藥物濃度的增加而逐漸增加。蛋白含量檢測：與0μmol/L比較，JAK2、p-Stat3和Bcl-2蛋白表達量隨著濃度的增高逐漸降低，Bax表達增高。經Poisson關聯(lián)性分析JAK2和p-Stat3呈正相關，r=0.67；JAK2和Bcl-2呈正相關，r=0.79；p-Stat3和Bcl-2呈正相關，r=0.70；JAK2、p-Stat3、Bcl-2和Bax均呈負相關，r=-0.44、-0.42、-0.40。
　

7、　放射敏感性實驗結果顯示：對照組和實驗組細胞存活分數(shù)(survival fraction,SF)均隨著照射劑量的增加而降低，且藥物組降低較前者更顯著。6種放射生物學參數(shù)之間比較,實驗組較對照組差別有統(tǒng)計學意義。在給予4Gy劑量照射后，0、25、50和100μmol/L濃度組JAK2分別為0.94±0.09、0.78±0.02、0.31±0.01、0.15±0.03，p-Stat3分別為0.94±0.83、0.85±0.0.13、0.43

8、±0.03、0.23±0.02。與未照射組相比，兩種蛋白表達均下降，且當AG490濃度≥50μmol/L時差異具有顯著性P＜0.05）。
　　結論:
　　隨著AG490濃度的增加、作用時間的延長，對體外培養(yǎng)的甲狀腺髓樣癌TT細胞抑制作用逐漸增加，細胞凋亡率逐漸增加，進一步說明細胞增殖受到抑制。在給予單劑量照射后發(fā)現(xiàn)細胞生存率隨劑量增加逐漸降低，含藥組更明顯，且放射生物學參數(shù)也相應變化。蛋白檢測表明JAK2、p-Stat3、B