磁共振T2-mapping成像及分子成像評價大鼠肝纖維化的實驗研究.pdf

1、第一部分大鼠肝纖維化動物模型的建立及其磁共振 T2* mapping成像定量評價
　　目的:采用四氯化碳誘導(dǎo)建立大鼠肝纖維化模型，探討磁共振T2* mapping成像在評價大鼠肝纖維化方面的能力。
　　方法:35只雄性Sprague-Dawley大鼠，隨機(jī)分為實驗組（n=30）和對照組（n=5），采用經(jīng)腹腔注入50％四氯化碳油溶液，劑量為0.1 mL/100 g，每周兩次，共注射12周。采用磁共振Muti-Echo FGRE

2、序列T2* mapping成像（TR160 ms，TE2.7～22.3 ms，F(xiàn)OV=10×10 cm）測量肝纖維化大鼠肝臟 R2*值；采用原子吸收分光光度計火焰法測定肝鐵含量（liver iron content, LIC）。采用蘇木素-伊紅染色及Masson染色評價大鼠肝纖維化程度。采用統(tǒng)計軟件SPSS17.0分析不同程度肝纖維化的 R2*值和 LIC的差異及與病理的相關(guān)性，采用受試者工作特征曲線（receiver operatin

3、g characteristics curve, ROC曲線）評價R2*值、LIC預(yù)測肝纖維化分期的能力，選擇最大約登指數(shù)作為最佳臨界值。
　　結(jié)果:實驗組大鼠存活23只，死亡7只，死亡率23.3%，肝纖維化分期為S1期4只、S2期8只、S3期7只、S4期4只。對照組5只大鼠肝纖維化分期均為S0期。隨著纖維化程度的加重，肝臟R2*、LIC平均值呈逐漸增大的趨勢，R2*值、LIC與肝纖維程度具有高度的正相關(guān)性。R2*值、LIC除S0

4、與S1、S1與S2比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）外，在其它各期比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。R2*值預(yù)測S1期以上、S2期以上、S3期以上及S4期的肝纖維化的最佳臨界值分別為46.84 Hz、55.30 Hz、68.06 Hz、78.79 Hz。LIC預(yù)測S1期以上、S2期以上、S3期以上及S4期的肝纖維化的最佳臨界值分別為131.29μg/g、155.39μg/g、187.09μg/g、222.95μg/g。
　

5、　結(jié)論:經(jīng)腹腔長期給予50%四氯化碳油溶液（按0.1 mL/100 g劑量，每周兩次）可誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的形成，并且成模率較高，周期短。R2*值可有效評價中、重度肝纖維化，也可成為定量評價肝纖維化模型LIC的指標(biāo)。
　　第二部分 ASGPR靶向超順磁性全氟溴辛烷納米粒的制備及體內(nèi)外靶向研究
　　目的:制備去唾液酸糖蛋白受體（ASGPR）靶向超順磁性全氟溴辛烷納米粒（M-PFOBNP），并進(jìn)行體外靶向研究及體內(nèi)外磁共振成像效果

6、研究。
　　方法:采用還原胺法合成ASGPR的配體半乳糖化多聚賴氨酸，薄膜-超聲法制備ASGPR靶向M-PFOBNP。采用光學(xué)顯微鏡下觀察對比劑的形態(tài)，原子吸收分光光度計火焰連續(xù)法測定對比劑的鐵含量， Malvern納米粒度及Zeta電位分析儀檢測對比劑的平均粒徑及Zeta電位。采用熒光顯微鏡及激光共聚焦觀察體外靶向效果，MTT法檢測對比劑對細(xì)胞活性的影響。采用磁共振T2* mapping成像評價對比劑對大鼠肝臟的成像效果。

7、>　　結(jié)果: ASGPR靶向M-PFOBNP形態(tài)規(guī)則、分散均勻。原子吸收分光光度計火焰連續(xù)法測定對比劑的鐵含量為52.79μg/mL，平均粒徑約285.6±4.6 nm，Zeta電位為+15.8 mV。體外靶向?qū)嶒炛邪l(fā)現(xiàn)在60 min時BRL細(xì)胞膜上結(jié)合大量對比劑。MTT法測得不同濃度ASGPR靶向M-PFOBNP的吸光度值之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。ASGPR靶向M-PFOBNP較M-PFOBNP、超順磁性Fe3O4納米粒使

8、T2*弛豫時間下降更明顯，R2*值更大。
　　結(jié)論: ASGPR靶向 M-PFOBNP可作為一種肝靶向?qū)Ρ葎┯糜诟闻K受體監(jiān)測的MRI研究。
　　第三部分 ASGPR靶向超順磁性全氟溴辛烷納米粒磁共振分子成像評價早期肝纖維化的實驗研究
　　目的:探討ASGPR靶向超順磁性全氟溴辛烷納米粒（M-PFOBNP）磁共振分子成像在大鼠早期肝纖維化診斷中的價值。
　　方法:實驗組20只雄性Sprague-Dawley大鼠采用

9、經(jīng)腹腔注入50%四氯化碳油溶液，劑量為0.1 mL/100 g，每周兩次，共注射6周，另選5只作為對照，采用生理鹽水經(jīng)腹腔注入。造模結(jié)束后所有大鼠經(jīng)尾靜脈注射ASGPR靶向M-PFOBNP，劑量為0.2 mL/100 g。注射前、注射后2小時行MRI檢查分析大鼠肝臟R2*值的改變。MRI檢查結(jié)束后腹腔注射過量3%戊巴比妥鈉溶液處死實驗大鼠，取出肝臟組織，行病理學(xué)檢查及大鼠肝臟ASGPR含量的測定。
　　結(jié)果:實驗組造模6周后大鼠存

10、活14只，死亡6只，實驗組14只大鼠肝纖維化分期：S1期9只、S2期5只。對照組5只大鼠肝纖維化分期均為S0期。ASGPR靶向M-PFOBNP注射前大鼠S0期、S1期、S2期的R2*值分別為43.42±3.39 Hz，49.02±5.82 Hz，53.50±4.72 Hz，僅S0期與S2期比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。注射后R2*值分別為422.92±6.59 Hz、406.57±9.39 Hz、392.21±8.38 Hz，注