瑤藥石柑子的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究.pdf

1、目的:
　　在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，應(yīng)用現(xiàn)代分離手段、分析技術(shù)和評(píng)價(jià)方法對(duì)瑤藥石柑子進(jìn)行全面系統(tǒng)的藥學(xué)研究，初步明確石柑子中的部分化學(xué)成分，建立石柑子高效液相色譜和紅外光譜指紋圖譜，擬定石柑子藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案，建立石柑子水分及浸出物含量的近紅外定量模型，并對(duì)石柑子抗炎鎮(zhèn)痛的藥效學(xué)及水提物的急性毒性進(jìn)行初步研究。
　　方法:
　　1.采用系統(tǒng)分離法對(duì)石柑子乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進(jìn)行分離、純化，并結(jié)合色譜、質(zhì)譜和核磁法對(duì)所得化

2、合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。
　　2.采用高效液相色譜法和紅外光譜法對(duì)不同產(chǎn)地的石柑子藥材進(jìn)行指紋圖譜研究，并對(duì)24批樣品的高效液相色譜及紅外光譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。
　　3.采用顯微鑒別法對(duì)石柑子莖橫切面及粉末進(jìn)行觀察，采用薄層色譜法對(duì)石柑子中的β-谷甾醇和阿魏酰酪胺進(jìn)行鑒別，從而建立石柑子藥材的鑒別方法。采用高效液相色譜法建立石柑子中阿魏酰酪胺的含量測(cè)定方法并規(guī)定限量。對(duì)石柑子藥材的水分、總灰分和浸出物等檢查的測(cè)定方法進(jìn)行考察并規(guī)定

3、限量。
　　4.測(cè)定24批石柑子藥材的近紅外光譜，并結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件，建立石柑子藥材水分及浸出物的近紅外定量校正模型。
　　5.采用醋酸扭體法對(duì)石柑子水提液和醇提液的鎮(zhèn)痛效果進(jìn)行研究，以小鼠扭體次數(shù)為指標(biāo)，計(jì)算疼痛抑制率，從而對(duì)石柑子的鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。采用皮下注射Freund's完全佐劑誘導(dǎo)佐劑型關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠模型，以大鼠足跖腫脹度和血清中白介素-1β含量水平為指標(biāo)，對(duì)石柑子的抗

4、炎活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　6.采用小鼠口服灌胃給藥對(duì)石柑子水提物的急性毒性進(jìn)行研究。采用Bliss法計(jì)算石柑子水提物的小鼠半數(shù)致死量(LD50)及最大耐受量(MTD)，以此對(duì)石柑子水提物的急性毒性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果:
　　1.從石柑子的乙酸乙酯部位共分離并鑒定了4個(gè)化合物，分別為反式-N邛可魏酰酪胺、丁香酸、香草酸和β-谷甾醇，其中反式-N-阿魏酰酪胺和丁香酸為首次從該植物中分離得到。
　　2.建立了石柑子HPLC

5、指紋圖譜共有模式，并確定了16個(gè)共有峰，指認(rèn)出2＃、3＃、11＃分別為香草酸、丁香酸和阿魏酰酪胺。24批石柑子指紋圖譜相似度計(jì)算結(jié)果顯示，12批樣品的相似度在0.9以上，9批樣品的相似度在0.8～0.9之間，僅有3批樣品的相似度在0.7～0.8之間。
　　3.建立了石柑子紅外光譜指紋圖譜，并確定了15個(gè)特征吸收峰，通過對(duì)圖譜的整體性狀及特征吸收峰的比對(duì)，達(dá)到快速鑒別的目的。
　　4.建立了石柑子藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):
　　(

6、1)確定了石柑子莖橫切面和粉末的顯微特征。
　　(2)建立了石柑子中β-谷甾醇和阿魏酰酪胺的薄層鑒別方法。
　　(3)建立了石柑子中阿魏酰酪胺的高效液相含量測(cè)定方法。并對(duì)24批石柑子藥材的阿魏酰酪胺含量進(jìn)行聚類分析，剔除離群樣品后暫定石柑子藥材中阿魏酰酪胺含量不得低于0.03％。
　　(4)24批石柑子的水分平均值為10.75％，總灰分平均值為8.44％;暫定石柑子藥材水分不得大于13.0％，總灰分不得大于11.0％。

7、
　　(5)確定石柑子浸出物的測(cè)定方法為熱浸法，浸出溶劑為50％乙醇;24批石柑子的醇溶性浸出物平均值為9.26％，暫定石柑子醇溶性浸出物不得小于7.0％。
　　5.建立了石柑子水分及浸出物含量的近紅外定量模型。水分近紅外模型的校正集均方根偏差（RMSEC）為0.132，交叉驗(yàn)證均方根偏差(RMSECV)為0.238，驗(yàn)證集的預(yù)測(cè)相對(duì)偏差為1.49％;浸出物近紅外模型的RMSEC為0.158，RMSECV為0.297，驗(yàn)證集

8、的預(yù)測(cè)相對(duì)偏差為0.93％，說明模型性能良好，預(yù)測(cè)準(zhǔn)確，可用于石柑子水分和浸出物含量的快速測(cè)定。
　　6.藥效學(xué)研究表明，石柑子水提液和醇提液均能顯著降低醋酸致疼痛的小鼠扭體次數(shù);石柑子水提液高劑量組和醇提液高劑量組能顯著降低AA模型大鼠的足跖腫脹度;石柑子水提液高、低劑量組能顯著降低AA模型大鼠血清中白介素-1β的含量水平。說明石柑子水提液具有良好的鎮(zhèn)痛抗炎活性，且藥效與劑量呈正相關(guān)。
　　7.石柑子水提物小鼠口服急性毒性

9、研究表明，小鼠半數(shù)致死量為207.91g生藥/kg，最大耐受量為134.64g生藥/kg。小鼠的最大耐受量是人的臨床給藥劑量的269.28倍，表明石柑子水提液的急性毒性較小，常規(guī)用量下安全性較高。
　　結(jié)論:
　　本研究通過對(duì)石柑子的化學(xué)成分、指紋圖譜、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥效學(xué)和急性毒性進(jìn)行研究，全面對(duì)石柑子藥材的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，為后期活性部位和活性成分的篩選奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)，為石柑子藥材的質(zhì)量控制提供了可行的標(biāo)準(zhǔn)，為臨床用藥的有效性和