胞質(zhì)M-CSF通過調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬與凋亡介導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞耐藥.pdf

1、目的：驗(yàn)證巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞耐藥，闡明胞質(zhì)M-CSF對MCF-7細(xì)胞自噬與凋亡的影響，探討胞質(zhì)M-CSF是否通過調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬與凋亡介導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞耐藥。
　　方法：用含10％NBCS(新生牛血清)的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)胞質(zhì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 M-CSF的MCF-7細(xì)胞（MCF-7-M），穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空載體的MCF-7細(xì)胞（MCF-7-C），親本MCF-7細(xì)胞。 MTT法驗(yàn)證胞質(zhì)M-CSF對MCF-7細(xì)胞藥物敏

2、感性的影響；蛋白印跡法、Hoechst33342染色法、流式細(xì)胞術(shù)檢測胞質(zhì)M-CSF對MCF-7細(xì)胞凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制；蛋白印跡法、MTT法檢測胞質(zhì)M-CSF對細(xì)胞自噬的影響及其與腫瘤耐藥的關(guān)系。
　　結(jié)果： MTT法結(jié)果顯示，與MCF-7以及 MCF-7-C細(xì)胞相比，MCF-7-M細(xì)胞對阿霉素（ADM）以及順鉑（CDDP）的敏感性降低（p<0.01），且PI3K抑制劑LY294002、Akt抑制劑SH-6以及Survivin抑

3、制劑YM155均可增強(qiáng)MCF-7-M細(xì)胞對ADM或CDDP的敏感性（p<0.01）；Hoechst33342染色法、流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，在抗腫瘤藥作用下，與MCF-7以及MCF-7-C細(xì)胞相比，MCF-7-M細(xì)胞凋亡率顯著降低（p<0.01）,且LY294002、SH-6以及YM155均可增強(qiáng)抗腫瘤藥作用下MCF-7-M細(xì)胞凋亡率（p<0.01）；蛋白印跡法結(jié)果顯示，與對照組細(xì)胞相比，MCF-7-M細(xì)胞PI3K、p-PI3K、Akt

4、、p-Akt以及 Survivin的表達(dá)顯著升高（p<0.01），LY294002或 SH-6顯著抑制MCF-7-M細(xì)胞p-Akt以及Survivin的表達(dá)（p<0.01）；蛋白印跡法結(jié)果顯示，在抗腫瘤藥ADM或CDDP的作用下，與對照組細(xì)胞相比，MCF-7-M細(xì)胞自噬水平增強(qiáng)（p<0.01），MTT法結(jié)果表明，上述MCF-7-M細(xì)胞發(fā)生自噬性細(xì)胞死亡。
　　結(jié)論：胞質(zhì)M-CSF通過激活PI3K/Akt/Survivin信號通路介