ⅢB-Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)寒熱證候與EGFR狀態(tài)相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　1.臨床部分
　　EGFR-TKIs已成為EGFR敏感突變的ⅢB/Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌的一線治療。在臨床實踐中，通過觀察發(fā)現(xiàn)ⅢB/Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)寒證患者的EGFR突變率高于熱證，故該研究主要探討中醫(yī)寒熱證候與EGFR基因狀態(tài)是否存在關(guān)聯(lián)性，研究結(jié)果可為進(jìn)一步選擇何種治則（清熱/溫陽）中藥聯(lián)合EGFR-TKIs提供有力理論依據(jù)。
　　2.實驗部分
　　選取2種對EGFR-TKIs不同敏感度的人肺腺癌細(xì)

2、胞株(H1975、PC9)接種于裸鼠皮下，成功構(gòu)建肺癌移植瘤模型，以期模擬臨床中對EGFR-TKIs耐藥與敏感患者。觀察不同治則（清熱/溫陽）中藥聯(lián)合EGFR-TKIs后對兩種肺癌移植瘤療效的影響，明確何種治則中藥聯(lián)合EGFR-TKIs后具有協(xié)同作用，并揭示其可能存在的分子學(xué)機制。
　　方法:
　　1.臨床部分
　　該研究采用前瞻性觀察性研究方法，納入初治及復(fù)發(fā)（至少6個月內(nèi)未接受抗腫瘤治療）的ⅢB/Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌患

3、者，對其進(jìn)行中醫(yī)四診資料采集與EGFR基因檢測，且由至少2位中醫(yī)師分別對患者進(jìn)行中醫(yī)寒熱證候辨證，然后分析患者中醫(yī)寒熱證候與EGFR基因狀態(tài)是否存在關(guān)聯(lián)性;將四診資料納入聚類分析進(jìn)行中醫(yī)證候分類，驗證中醫(yī)證候分類結(jié)果與寒熱證候、EGFR基因狀態(tài)之間是否存在相關(guān)性;最后，將EGFR基因狀態(tài)與其他因素采用非條件逐步多元logistic回歸分析，再次明確EGFR基因狀態(tài)與中醫(yī)寒熱證候是否存在獨立相關(guān)性。
　　2.實驗部分
　　EG

4、FR-TKIs耐藥模型是由人肺腺癌細(xì)胞株H1975構(gòu)建的肺癌移植瘤:培養(yǎng)足量細(xì)胞，將其配置為濃度為3×107的細(xì)胞懸液，皮下注射于60只BALB/c裸鼠右前肢靠近背側(cè)，每只注射0.2ml，成功建立模型后，將裸鼠采用區(qū)組隨機方法分為6組，即生理鹽水組、參附湯組、清開靈口服液組、參附湯聯(lián)合吉非替尼組、清開靈口服液聯(lián)合吉非替尼組，每組10只，相應(yīng)藥物干預(yù)21日，每隔2日進(jìn)行瘤體長徑及與其相垂直的最短徑測量，并對裸鼠稱重，檢測移植瘤體積、裸鼠體

5、重及瘤重，并繪制瘤體生長曲線，計算抑瘤率。并利用免疫組化法檢測EGFR信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)。EGFR-TKIs敏感模型是由人肺腺癌細(xì)胞株P(guān)C9構(gòu)建的肺癌移植瘤:同上述造模方法;不同之處:皮下接種于BALB/c裸鼠的細(xì)胞濃度為2×107/ml;相應(yīng)藥物干預(yù)14日;每隔1日測量瘤體。
　　結(jié)果:
　　1.臨床部分
　　(1)從2013年3月到2015年5月共納入310例患者，其中299例接受EGFR基因檢測。對納入的310

6、例患者進(jìn)行中醫(yī)寒熱辨證，寒證患者175例(56.45％)，熱證患者135例(43.55％)，其中EGFR突變患者中寒證76例(45.24％)，熱證34例(25.95％);EGFR野生型患者中寒證患者92例(54.76％)，熱證患者97例(74.05％)。研究發(fā)現(xiàn):患者EGFR基因狀態(tài)與中醫(yī)寒熱證候存在關(guān)聯(lián)性（P=0.001）。
　　(2)對四診資料納入聚類分析將所有患者分為A組與B組，其中A組132例(45.2％)與B組160例(

7、54.8％)，進(jìn)一步對A、B兩組患者中醫(yī)寒熱證候及EGFR基因狀態(tài)分析，研究發(fā)現(xiàn):A組中98例(74.24％)與B組中66例(41.25％)屬于寒證，A組中34例(25.76％)與B組中94例(58.75％)屬于熱證，證明患者中醫(yī)寒熱證候與聚類分析證候分類結(jié)果存在關(guān)聯(lián)性（P＜0.001）;其中A組中58例(45.67％)與B組中44例(28.57％)為EGFR突變型患者，A組中69例(54.33％)與B組中110例(71.43％)為EG

8、FR野生型患者，再次證明患者EGFR基因狀態(tài)與聚類分析證候分類結(jié)果之間同樣存在關(guān)聯(lián)性(P=0.003)。
　　(3)采用非條件逐步多元logistic回歸分析，結(jié)果顯示:患者EGFR基因狀態(tài)、血壓、吸煙史三者與中醫(yī)寒熱證型之間存在獨立關(guān)聯(lián)性。
　　2.實驗部分
　　(1)H1975細(xì)胞株肺癌移植瘤
　　不同治則中藥聯(lián)合吉非替尼對移植瘤體積的影響:清開靈口服液組與參附湯組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001);

9、參附湯聯(lián)合吉非替尼組與吉非替尼組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.311)，但清開靈口服液聯(lián)合吉非替尼組與吉非替尼組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.020），且清開靈口服液聯(lián)合吉非替尼組與參附湯聯(lián)合吉非替尼組相比，差異同樣具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.002）。不同治則中藥聯(lián)合吉非替尼對瘤重的影響:清開靈口服液組與參附湯組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.001）;參附湯聯(lián)合吉非替尼組與清開靈口服液聯(lián)合吉非替尼組相比，差異亦具有統(tǒng)計學(xué)意義（P

10、=0.008），但兩者與吉非替尼組相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）;清開靈口服液聯(lián)合吉非替尼后金正均q值為1.19，即說明兩藥聯(lián)合后可能具有協(xié)同作用，且腫瘤抑制率最高為49.80％，作用機制可能是通過下調(diào)AKT、P-AKT、EGFR蛋白表達(dá)實現(xiàn)。而參附湯聯(lián)合吉非替尼后金正均q值為0.50，即說明兩藥聯(lián)合后可能表現(xiàn)為拮抗作用，其作用機制尚未被發(fā)現(xiàn)。
　　(2)PC9細(xì)胞株肺腺癌移植瘤
　　不同治則中藥聯(lián)合吉非替尼對移植

11、瘤體積的影響:清開靈口服液組與參附湯組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）;參附湯聯(lián)合吉非替尼組、清開靈口服液聯(lián)合吉非替尼組與吉非替尼組相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。不同治則中藥聯(lián)合吉非替尼對瘤重的影響:清開靈口服液組與參附湯組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);參附湯聯(lián)合吉非替尼組、清開靈口服液聯(lián)合吉非替尼組與吉非替尼組相比，差異同樣無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.ⅢB/Ⅳ期非小細(xì)

12、胞肺癌患者中醫(yī)寒熱證候與EGFR基因狀態(tài)可能存在關(guān)聯(lián)性，即EGFR基因突變型患者以中醫(yī)寒證多見，EGFR基因野生型患者以中醫(yī)熱證多見。
　　2.對于EGFR-TKIs耐藥型人肺腺癌細(xì)胞株H1975的移植瘤，清熱類的清開靈口服液在吉非替尼耐藥時可能更適合與吉非替尼聯(lián)合應(yīng)用，且聯(lián)合后可能具有協(xié)同增敏作用，其機制可能與下調(diào)AKT、P-AKT、EGFR蛋白表達(dá)有關(guān)。參附湯聯(lián)合吉非替尼后可能具有拮抗作用，其機制尚未被發(fā)現(xiàn)。該研究結(jié)論可能為患