HSF1對LPS誘導的G-CSF基因表達的影響及其分子機制研究.pdf

1、熱休克因子1(heat shock factor 1，HSFl)是一種在熱休克反應過程中激活的轉錄因子，除了能與HSPs基因啟動子區(qū)的熱休克元件(heat shock element，HSE)結合從而誘導熱休克蛋白基因表達外，還能直接或者間接調節(jié)許多非熱休克蛋白基因的表達。本室近年采用高通量基因芯片技術發(fā)現(xiàn)HSFl基因敲除(HSFl<'+>)小鼠內毒素血癥時有15個炎癥相關基因表達上調，其中之一就是粒細胞集落刺激因子(granulocy

2、te-colony stimulating factor,G-CSF)，這提示G-CSF可能是HSFl調控的靶基因之一。本研究旨在探討HSFl對G-CSF基因誘導表達的調控并揭示其可能的調控機制。 本研究利用穩(wěn)定轉染全長HSFl和失活型HSFl(缺失轉錄激活結構域)的RAW264.7細胞株，用ELISA技術從蛋白水平觀察HSFl對LPS所致的G-CSF分泌的影響；利用生物信息學技術分析G-CSF基因啟動子區(qū)的基本結構，構建含G

3、-CSF基因啟動子序列的熒光素酶報告基因質粒觀察上述兩種HSFl對LPS誘導的G-CSF基因啟動子轉錄活性的影響；利用穩(wěn)定轉染全長HSFl的RAW264.7細胞株，用Westem blotting觀察HSFl對LPS所致的核內核因子白介-6(nucleaur factor-interleukin6，NF-IL6)水平改變的影響；用EMSA觀察全長和失活性HSFl對LPS所致的NF-IL6與G-CSF基因啟動子結合的影響。結果顯示：

4、 1．全長和失活型HSFl都能抑制LPS所致RAW264.7細胞G-CSF的分泌； 2．生物信息學分析發(fā)現(xiàn)，G-CSF基因啟動子區(qū)沒有完整的HSE，但核心啟動子區(qū)及其上游各存在1個NF-IL6的結合元件； 3．全長和失活型HSFl均可抑制LPS誘導的G-CSF基因啟動子轉錄活性； 4．全長HSFl可以抑制LPS所致的核內NF-IL6的增多； 5．全長和失活型HSFl可以抑制LPS所致的NF-IL6與G-

5、CSF基因啟動子的結合。 綜上所述，HSFl通過抑制LPS所致的NF-IL6與G-CSF基因啟動子的結合和核內NF-IL6的增多，從而抑制LPS所致的G-CSF的基因轉錄和蛋白分泌，且上述功能并不依賴HSFl的轉錄激活結構域的存在。鑒于HSFl可通過亮氨酸拉鏈結構域(1eucine zipper domain)與轉錄因子NF-IL6結合，且G-CSF基因啟動子區(qū)不存在HSE，故HSFl可能通過與NF-IL6相互作用而抑制LPS所