熒光標記VEGF127-133靶向VEGFR-2實驗研究.pdf

1、目的：本研究以腫瘤細胞上VEGFR-2(Vascular endothelial growth factor receptor-2)為靶點，以能與其特異性結合的 VEGF127-133氨基酸短肽配體為靶向分子，并以熒光素作為成像部分，構建熒光標記 VEGF127-133的新型靶向分子探針，并探討該靶向分子探針在體外對腫瘤細胞靶向性能，為進一步活體內(nèi)靶向成像奠定實驗基礎。
　　方法：（1）.細胞免疫熒光實驗檢測HepG2與HUVEC

2、細胞VEGFR-2表達情況。分為實驗組、對照組和空白組。實驗組爬片上加抗VEGFR-2的一抗和熒光標記二抗；對照組加等量的熒光二抗；空白組上加等量的PBS。觀察各組爬片上細胞的熒光強度。
　　(2). Western-blot定量檢測HepG2與HUVEC細胞VEGFR-2蛋白表達情況。
　　(3).對比劑偶聯(lián)。合成熒光標記的VEGF127-133和隨機小肽，并進行相關理化數(shù)據(jù)測試。
　　(4).細胞熒光實驗檢測熒光標

3、記VEGF127-133體外對HepG2與HUVEC細胞靶向性及特異性。實驗分兩批進行。第一批實驗組（HepG2與HUVEC細胞爬片）加入FITC標記VEGF127-133，對照組加入FITC標記的隨機序列小肽。觀察爬片上細胞的熒光強度。第二批實驗組（HepG2細胞爬片）與對照組（正常肝細胞爬片）加入等量的FITC標記VEGF127-133，觀察爬片上細胞的熒光強度。
　　(5).小動物活體成像掃描初步檢測熒光標記VEGF127-

4、133對HepG2肝癌荷瘤鼠的靶向性能。經(jīng)小鼠尾靜脈實驗組注入Cy5.5標記VEGF127-133，對照組注入Cy5.5標記的隨機序列小肽，觀察熒光在小鼠體內(nèi)分布情況。
　　結果:(1).實驗組HUVEC及HepG2細胞膜及胞質(zhì)內(nèi)均有VEGFR-2表達；對照組及空白組爬片上細胞膜及胞漿內(nèi)均沒有VEGFR-2陽性表達。
　　(2). Western-blot檢測HUVEC細胞及HepG2細胞均有VEGFR-2蛋白的表達。

5、>　　(3).成功將熒光材料FITC及Cy5.5連接在小肽VEGF127-133和隨機小肽上。
　　(4).體外靶向性試驗：FITC標記的靶向小肽對HepG2與HUVEC細胞具有靶向性及特異性，F(xiàn)ITC標記的隨機序列小肽對HepG2與HUVEC細胞不具有靶向性。
　　(5).活體試驗：Cy5.5標記的靶向探針能對腫瘤區(qū)靶向顯影。
　　結論：以VEGF127-133為靶向運載體，F(xiàn)ITC或Cy5.5為顯像劑的新型靶向分子