新型腸道病毒71型滅活疫苗免疫策略關鍵技術研究.pdf

1、大量研究已表明手足口病(HFMD)患者中的重癥及死亡病例主要是由EV71所致。自1969年美國首次從患兒的糞便中分離出腸道病毒71型(EV71)以來，世界多個國家和地區(qū)均有EV71暴發(fā)和流行的報道。近年來，HFMD的流行成為我國大陸、臺灣地區(qū)以及東南亞國家的重大公共衛(wèi)生問題之一，造成巨大的經(jīng)濟和社會負擔。目前，臨床上尚無治療HFMD的特效藥物。疫苗成為預防和控制該病的傳播與流行的最有效的手段。研發(fā)有效的疫苗，探索科學合理的免疫策略，具有

2、重大的社會意義。本課題針對北京微谷生物制藥有限公司研發(fā)的新型EV71滅活疫苗(本文簡稱EV71疫苗)開展免疫策略關鍵技術的研究。
　　目的：
　　1.確定EV71疫苗的最佳免疫劑量、劑型和免疫程序。
　　2.評價EV71疫苗誘導的免疫反應的持久性，探討加強免疫的必要性。
　　3.確定EV71疫苗針對EV71所致HFMD/疾病的保護效力。
　　4.研究EV71疫苗保護效力的免疫學替代終點。
　　5.探索

3、EV71疫苗與其他腸道病毒之間可能存在的交叉免疫/保護作用。
　　6.研究不同批次EV71疫苗的批間一致性。
　　方法：
　　1.EV71疫苗的最佳免疫劑量劑型及免疫程序研究
　　采用隨機雙盲、安慰劑對照的研究設計，選擇幼兒組(12～60月齡)600人、嬰兒組(6～11月齡)600人，研究不同劑型不同劑量的EV71滅活疫苗(含佐劑160U、含佐劑320U、含佐劑640U疫苗以及無佐劑640U疫苗)的免疫原性和安全

4、性。比較受試者接種一針次和兩針次疫苗后血清抗體水平的差異及不良反應發(fā)生率，確定EV71疫苗的最佳免疫劑量、劑型及免疫程序。
　　2.EV71疫苗免疫持久性和加強免疫研究
　　基于最佳免疫劑量劑型及免疫程序研究的隊列，隨訪至第1針免疫后第8月和第14月進行血清檢測，觀察EV71疫苗誘導的抗EV71中和抗體的持久性。采用巢式隨機雙盲對照研究設計，在14個月時對已經(jīng)完成兩針次基礎免疫的受試者進行再次招募入組，按2∶1隨機分配給予相

5、同劑量劑型的EV71疫苗或安慰劑進行1針次加強免疫研究，比較各組受試者加強或不加強后的血清抗體反應水平差異，評價加強免疫的效果。
　　3.EV71疫苗的保護效力研究
　　通過采取多中心、隨機、雙盲、安慰劑對照優(yōu)效性設計，招募6～35月齡健康嬰幼兒按1∶1設計隨機分配以0、28天免疫程序接種EV71疫苗或安慰劑，評價免疫后的有效性和安全性。通過建立的腸道病毒病監(jiān)測系統(tǒng)，從第56天至第14月進行12個月的病例監(jiān)測隨訪，確定在監(jiān)測

6、期內發(fā)生的EV71所致疾病/HFMD，并通過發(fā)病密度計算疫苗的保護率。
　　4.EV71疫苗免疫學替代終點研究
　　基于保護效力研究隊列，采用巢式病例對照研究設計，進行免疫學替代終點的研究。以確診的EV71感染所致疾病為病例組，每個病例在發(fā)病初步確診后按1∶5的比例進行匹配，組成一個免疫學替代終點分析亞組。利用該亞組受試者第56天血清抗EV71中和抗體，計算不同中和抗體水平閾值下的特異度、靈敏度和約登指數(shù)，探索疫苗保護性的免

7、疫學替代終點。
　　5.EV71疫苗對其他腸道病毒交叉免疫/保護作用研究
　　EV71與脊髓灰質炎的交叉免疫作用是基于最佳免疫劑量劑型及免疫程序研究中的600名嬰兒組受試者進行的。利用受試者免疫前第0天、免疫后第28天、56天的血樣，在檢測EV71中和抗體的同時檢測抗脊髓灰質炎病毒的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗體，比較不同時間點脊髓灰質炎抗體水平的變化趨勢。
　　EV71疫苗與CA16或其他腸道病毒交叉保護作用是基于EV71疫苗保護

8、效力研究隊列，監(jiān)測第56天至第14個月的隨訪期內所發(fā)生的由CA16或其它腸道病毒感染所致的疾病/HFMD，評價EV71疫苗對CA16或其它腸道病毒感染的交叉保護效力。
　　6.EV71疫苗批間一致性研究
　　在保護效力研究人群中的EV71試驗疫苗組中進行巢式隨機雙盲的等效性研究。EV71試驗組受試者將按1∶1∶1隨機分配接種三個不同批次的含佐劑320U EV71疫苗。計算任意兩批次間的免疫后血清抗EV71中和抗體GMT比值，

9、如95％CI均在0.67～1.5之間，則三批疫苗的免疫一致性成立。
　　結果：
　　1.最佳免疫劑量、劑型和免疫程序:
　　接種第1針后28天，含佐劑160U組的抗EV71中和抗體GMT水平為36.91、含佐劑320U組為63.14、含佐劑640U組為82.39、無佐劑640U組為70.79、安慰劑對照組為18.00。第2針免疫后28天，含佐劑160U組中和抗體GMT水平為517.65、含佐劑320U組為831.75、

10、含佐劑640U組為1003.01、無佐劑640U組為330.34、安慰劑對照組為21.61。四個EV71疫苗組第2針后抗體GMT水平均高于安慰劑對照組，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。含佐劑640U組和含佐劑320U組的兩針后中和抗體水平差異無統(tǒng)計學意義。安全性結果顯示各疫苗組與安慰劑間的總體不良反應發(fā)生率無統(tǒng)計學差異。接種含佐劑160U和640U疫苗的嬰兒組的硬結不良反應發(fā)生率顯著高于接種不含佐劑640U疫苗的嬰兒。
　　2

11、.免疫持久性:
　　第8個月時，含佐劑160U組、含佐劑320U組、含佐劑640U組和無佐劑640U組的抗EV71中和抗體GMT分別為95.58、130.06、146.74和65.25，與第56天水平相比出現(xiàn)明顯下降。第14個月，含佐劑160U組、含佐劑320U組、含佐劑640U組和無佐劑640U組的抗EV71中和抗體GMT分別為199.38、246.79、281.09和144.78。含佐劑640U組的GMT水平最高，其次為含佐劑

12、320U組和160U組，三組間差異無統(tǒng)計學意義。第14個月，加強一針免疫后GMT水平是兩針次基礎免疫后28天GMT水平的6～10倍。
　　3.疫苗保護效力:
　　EV71疫苗免疫后1年內，對EV71感染所致HFMD保護率為90.93％(95％CI:70.42％-97.22％)，對EV71感染所致疾病保護率為81.85％(95％CI:61.46％-91.46％)，對EV71感染所致HFMD住院病例保護率為100.00％(95％

13、CI:41.56％-100.00％)。
　　4.免疫學替代終點:
　　免疫后第56天在抗EV71中和抗體閾值為1:16時，約登指數(shù)最大，靈敏度和特異度分別為84.6％和70.8％。其次是在抗EV71中和抗體閾值為1:32時，靈敏度和特異度分別為88.5％和66.0％。
　　5.交叉免疫/交叉保護作用:
　　EV71疫苗接種對嬰兒受試者體內抗脊髓灰質炎病毒中和抗體水平無干擾作用。EV71疫苗對CA16感染所致疾病、

14、非EV71非CA16的其他腸道病毒感染所致疾病和臨床診斷的HFMD樣疾病的保護率分別為-0.10％(95％CI-11.45-10.09)、3.98％(95％CI-2.98-10.48)、和3.16％(95％CI-6.01-11.53)。
　　6.疫苗的批間一致性:
　　三批次EV71試驗疫苗接種人群第1針免疫后第56天抗EV71中和抗體GMT比值均在等效區(qū)間0.67～1.50內。
　　結論：
　　1.含佐劑的EV

15、71疫苗劑型的免疫原性優(yōu)于無佐劑劑型，且兩針次接種后的抗體反應水平顯著高于一針次免疫后的抗體反應水平;在含佐劑的160U、320U和640U三個劑量EV71疫苗組具有一定的劑量反應關系;最終確定了含佐劑320U的最佳免疫劑量劑型及0、28天兩針次免疫程序。
　　2.通過對免疫后血清抗體水平持續(xù)觀察，得出了在目前EV71自然暴露普遍的情況下無需加強免疫的結論。
　　3.EV71疫苗對EV71所致疾病/HFMD有較高的保護效力。

16、
　　4.采用約登指數(shù)法進行定量分析，提出免疫后第56天抗EV71中和抗體滴度1:16～1:32為保護性免疫學替代終點。
　　5.證實EV71疫苗對EV71以外的其他腸道病毒無交叉保護作用，與脊髓灰質炎疫苗無交叉免疫作用。
　　6.該EV71疫苗不同批的次間一致性成立。
　　意義：
　　本課題圍繞該新型EV71疫苗免疫策略研究中的最佳免疫劑量、劑型及免疫程序選擇，疫苗的保護效力、針對其他腸道病毒的交叉免疫/