鯉皰疹病毒Ⅱ型滅活疫苗免疫應(yīng)答機(jī)理與保護(hù)效果研究.pdf

1、異育銀鯽(Carassius gibelio)是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)，在淡水養(yǎng)殖中占有非常重要的地位。近年來(lái)，我國(guó)鯽魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)中暴發(fā)一種病毒性疾病——鯽造血器官壞死癥，其病原為鯉皰疹病毒Ⅱ型（Cyprinid herpesvirus2，CyHV-2），給鯽魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響了鯽魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。疫苗免疫被認(rèn)為是預(yù)防水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物傳染性疾病最為有效的方法。本研究對(duì)CyHV-2細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗的制備方法、有效免疫劑量、鯽魚(yú)免疫后的外

2、周血免疫指標(biāo)、血清生化指標(biāo)變化規(guī)律與保護(hù)效果進(jìn)行了研究，初步建立一種預(yù)防鯽造血器官壞死癥的免疫方法。本論文的主要內(nèi)容如下:
　　1.采用β-丙內(nèi)酯（β-propiolactone，BPL）滅活細(xì)胞培養(yǎng)的鯉皰疹病毒Ⅱ型（CyHV-2）制備滅活疫苗，分別以不同劑量的疫苗通過(guò)腹腔注射免疫健康異育銀鯽。在免疫后7、14、21、28d，從對(duì)照組和各免疫組中隨機(jī)挑選三尾鯽魚(yú)尾靜脈采血，取血清進(jìn)行中和抗體滴度測(cè)定。免疫30d后攻毒試驗(yàn)，每尾鯽魚(yú)

3、經(jīng)腹腔注射500ul的1.0×107TCID50ml-1的CyHV-2活病毒，持續(xù)觀察14d，記錄魚(yú)體死亡情況，評(píng)價(jià)不同劑量疫苗的免疫保護(hù)效果。結(jié)果顯示，免疫劑量為1.0×107TCID50ml-1的試驗(yàn)組，在人工感染試驗(yàn)后，其相對(duì)免疫保護(hù)力可達(dá)71.4％。
　　2.鯉皰疹病毒Ⅱ型滅活疫苗注射免疫健康鯽魚(yú)，分別于免疫后不同時(shí)間點(diǎn)采集魚(yú)體外周血和組織樣，計(jì)數(shù)外周血紅細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)以及白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)，測(cè)定吞噬細(xì)胞活性、血清的抗體效價(jià)和

4、血清酶活性，檢測(cè)免疫相關(guān)基因表達(dá)量的變化。研究表明，免疫鯽魚(yú)外周血中紅細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)目在免疫后一周內(nèi)顯著增加，并于第4天和第7天達(dá)峰值，且極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)中嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞百分比分別在第4天和第7天到達(dá)最高值;隨后，淋巴細(xì)胞百分比在免疫后第14天開(kāi)始顯著高于對(duì)照組(0.01＜P＜0.05)，第21天達(dá)峰值。免疫后一周內(nèi)細(xì)胞吞噬活性顯著升高，且吞噬百分比和吞噬指數(shù)均在第4天達(dá)到最高值，分別為(33.5