豬流行性腹瀉病毒rSl蛋白親和肽的篩選與鑒定.pdf

1、豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemicdiarrhea virus，PEDV)引起的一種急性、高度接觸性腸道傳染病，豬流行性腹瀉病在各地區(qū)廣泛流行，造成了很大的經(jīng)濟損失。豬流行性腹瀉病毒的研究成為現(xiàn)今研究的熱點之一。豬流行性腹瀉主要以嚴重的嘔吐、脫水和腹瀉為特征，尤其對仔豬致病性最強。豬流行性腹瀉病毒S蛋白是重要的表面結構蛋白，含有主要的抗原決定簇

2、和受體結合域，且具有較好的免疫原性。
　　 本研究對豬流行性腹瀉病毒S蛋白的免疫優(yōu)勢區(qū)和受體結合域進行鑒定與生物淘選，為豬流行性腹瀉病毒診斷方法和新型疫苗的開發(fā)及抗病毒機制研究提供信息。
　　 本研究成功將擴增的豬流行性腹瀉病毒rS1基因克隆到原核表達載體pGEX-6P-1上，構建重組表達質粒pGEX-6P-1-rS1，經(jīng)IPTG誘導，獲得了以包涵體形式表達的重組蛋白。以重組蛋白作為免疫原制備兔抗rS1抗體并進行效價測定

3、及生物活性檢測。結果證實多抗效價達1∶65536，間接ELISA和Western-Blot實驗證實此多抗可與rS1蛋白發(fā)生很好的抗原抗體反應，說明該多抗能夠用于rS1蛋白特異性檢測。
　　 進一步的研究以豬流行性腹瀉病毒rS1重組蛋白為靶分子，通過噬菌體生物淘選，對其進行了五輪噬菌體篩選。第四輪對表達載體pGEX-6P-1的標簽蛋白GST進行篩選，對第五輪洗脫物隨機淘選到的10個噬菌體進行序列測定，最終共得到五種噬菌體序列，其中