豬流行性腹瀉病毒S1蛋白親和肽的篩選與鑒定.pdf

1、豬流行性腹瀉(PED)是由豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起的一種豬的急性、高度接觸性腸道傳染病。自1978年報道以來在歐洲以及亞洲許多國家相繼爆發(fā),給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大損失,因此對于PED的診斷以及疫苗的研究就顯得尤為重要。PEDV纖突糖蛋白(S)是位于病毒粒子表面的結(jié)構(gòu)蛋白,它既含有介導(dǎo)病毒侵入宿主細胞的受體結(jié)合域,又擁有介導(dǎo)機體產(chǎn)生病毒中和抗體的抗原表位,具有良好的免疫原性。
　　 利用生物學(xué)軟件對PEDVS基因進行了抗原位點分

2、析,在不破壞線性抗原位點的前提下將S基因進行分割獲得S基因的片段命名為S1。本試驗在高效表達PEDVS1蛋白后,利用噬菌體展示技術(shù)篩選并鑒定了能與PEDVS1蛋白相互作用的多肽分子,為進行PED的快速診斷以及開發(fā)有效的新型疫苗奠定了基礎(chǔ)。
　　 本試驗成功構(gòu)建了編碼PEDVS1蛋白的pET30a-S1原核重組表達質(zhì)粒,并在E.ColiRosetta中進行原核表達。將制備并純化的重組蛋白進行復(fù)性和活性檢測,結(jié)果表明這種融合蛋白具有

3、一定的生物學(xué)活性。以重組蛋白為免疫原免疫新西蘭白兔制備了多克隆抗體。免疫熒光實驗以及病毒抑制實驗證明此多克隆抗體具有良好的生物學(xué)活性。
　　 利用噬菌體隨機十二肽庫,以PEDVS1重組蛋白為靶分子,對其進行了四輪生物淘選。對第四輪洗脫物隨機淘選出的10個噬菌體單克隆的核苷酸序列進行測定,并進行多肽序列的推導(dǎo),結(jié)果表明,經(jīng)過對靶分子的四輪篩選后,最終篩選出三個具有高度同源性的多肽,序列分別是MPAVMSSAQVPR,NL,SNRL