豬流行性腹瀉病毒特性研究及其種毒制備.pdf

1、豬流行性腹瀉(porcine epidemic diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemicdiarrhea virus，PEDV)引起的一種嚴(yán)重的病毒性傳染病。該病的特征是可以導(dǎo)致哺乳仔豬發(fā)生嚴(yán)重的腹瀉、嘔吐、脫水，并且致死率極高。本病在歐洲和亞洲傳播非常廣泛，每年都會(huì)對(duì)一些國(guó)家和地區(qū)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的危害。所以對(duì)于豬流行性腹瀉的防治是當(dāng)務(wù)之急。對(duì)于大多數(shù)的病毒性腹瀉疾病來(lái)說(shuō)，

2、防治措施一般選擇疫苗免疫。雖然人們使用了現(xiàn)有的疫苗來(lái)防治豬流行性腹瀉病毒，但是該病毒還是出現(xiàn)在了免疫豬群中。豬流行性腹瀉病毒所造成的損害仍然在持續(xù)加重。近年來(lái)，有關(guān)豬流行性腹瀉病毒疫苗的研究已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展，但目前所面臨的主要問(wèn)題是豬流行性腹瀉病毒在種毒制備的過(guò)程中，繁殖條件復(fù)雜，病毒在細(xì)胞中培養(yǎng)的病毒滴度低，這些都嚴(yán)重妨礙了豬流行性腹瀉疫苗的研制。
　　 本研究為了提高豬流行性腹瀉病毒的繁殖滴度，對(duì)豬流行性腹瀉病毒的培養(yǎng)條

3、件進(jìn)行優(yōu)化并連續(xù)體外傳代培養(yǎng)，分別從胰酶濃度、吸附時(shí)間和培養(yǎng)方式三個(gè)方面對(duì)豬流行性腹瀉病毒的傳代培養(yǎng)條件進(jìn)行了摸索。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)最適的胰酶濃度范圍為1-5μg/mL，并且最適的培養(yǎng)方式為吸附液吸附1.5 h后棄去吸附液，加入維持液培養(yǎng)72 h收毒。通過(guò)以上的培養(yǎng)方式最終提高了病毒的滴度(TCID50)，TCID50為106.17/0.1 mLTCID50,從而降低了該病毒的致病性。
　　 本研究進(jìn)一步對(duì)PEDV HLJBY毒株的理化

4、特性的探究，發(fā)現(xiàn)PEDV HLJBY毒株對(duì)50℃及以上的溫度敏感，在此溫度以上即可達(dá)到熱滅活的效果;該毒株還對(duì)氯仿敏感;PEDV HLJBY毒株的pH比較穩(wěn)定,將該毒株的pH調(diào)至3，再調(diào)至原pH值，病毒的滴度并沒(méi)有明顯變化。
　　 本研究參照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2010年版第三部的要求對(duì)該病毒的特性進(jìn)行了系統(tǒng)研究與記錄。根據(jù)《中華人民共和國(guó)獸藥典》的要求進(jìn)行細(xì)胞和種毒的純粹檢查，結(jié)果顯示PEDV培養(yǎng)用Vero細(xì)胞和PEDV種