N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶V通過VE-cadherin及β1整合素介導內皮細胞的生物學效應.pdf

1、血管內皮細胞連續(xù)的覆蓋在在全身血管內膜上，研究發(fā)現(xiàn)內皮細胞的生理功能除了是血液和組織的屏障，還具有其他多種功能，如降低血管通透性，調節(jié)血液與組織的物質交換，減少無序侵入的血漿成分和血液細胞的數(shù)量；通過合成和分泌相關因子調節(jié)血管平滑肌功能；抑制白細胞的游走和侵入。鑒于這些生理功能，血管內皮細胞的損傷是諸如動脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病等一系列疾病的始動環(huán)節(jié)。因此，研究血管內皮細胞損傷的機制為心血管疾病的治療提供科學依據(jù)。本文主要探討血管內皮

2、細胞生物學功能發(fā)生變化時，存在著調控VE-cadherin，β1整合素的糖基化“開關”。這種作用有可能是通過GnT-V催化作用進而分配VE-cadherin，β1整合素上N-glycans的豐度影響內皮細胞功能。
　　第一部分：N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶V通過粘附分子VE-cadherin調控內皮細胞與單核細胞的粘附
　　本研究首先運用THP-1單核細胞與內皮細胞的粘附實驗確定IL-1β促進血管內皮細胞與單核細胞粘附的最佳時間

3、點和濃度點。其次通過Western blot及Lectin blot檢測發(fā)現(xiàn)，IL-1β(1μg·L-1，5μg·L-1，25μg·L-1)處理EA.hy926細胞24小時后，細胞中GnT-V蛋白及β1-6GlcNAc糖支鏈的表達下調，同時細胞中總VE-cadherin蛋白水平上調。同法IL-1β(5μg·L-1)處理EA.hy926細胞后，采用免疫共沉淀法檢測VE-cadherin上β-1，6GlcNAc糖支鏈的變化，發(fā)現(xiàn)IL-1β可

4、使VE-cadherin上β-1，6GlcNAc糖支鏈結構減少。另外，研究發(fā)現(xiàn)隨著IL-1β(1μgL-1，5μg·L-1，25μg·L-1)濃度增加，VE-cadherin復合物中β-catenin大量與其脫離。為了深入探索研究Gnr-V在內皮細胞中對VE-cadherin復合物的影響，通過細胞中GnT-V基因敲除和過表達正反兩個方面闡述GnT-V作用的可能性。實驗結果證明當GnT-V下調或上調，β-1，6GlcNAc糖支鏈相應隨著變

5、化；同時，VE-cadherin，VE-cadherin上β-1，6GlcNAc糖支鏈的變化相應隨之減少或增加。另外，β-catenin從VE-cadherin復合物上脫落的量也相應的增加或減少，THP-1單核細胞與內皮細胞的粘附能力增強。為了驗證IL-1β能夠通過影響GnT-V進而損傷內皮細胞，在GnT-V過表達后加入IL-1β(5μg·L-1)處理，與GnT-V過表達結果恰好相反。綜上表明：GnT-V可能通過改變細胞中VE-cadh

6、erin上β-1，6GlcNAc糖支鏈進而影響血管內皮細胞的生物學行為，炎癥因子IL-1β可能通過影響GnT-V導致內皮細胞損傷。
　　第二部分：IL-1β通過β1整合素糖基化修飾誘導EA.hy926細胞凋亡
　　IL-1β是白細胞介素1細胞因子家族的成員之一，是最重要的炎癥細胞因子之一，它介導了炎癥的重要過程，已有研究顯示IL-1β可以導致血管內皮細胞功能紊亂。認清這種細胞功能紊亂的機制，將會為動脈粥樣硬化的形成機制提供較

7、好的理論依據(jù)。為了探討IL-1β對血管內皮細胞損傷機制，以EA.hy926血管內皮細胞為研究對象，利用不同濃度IL-1β刺激24 h，采用Western blot方法檢測IL-1β對β1整合素，Bc1-2，Bax，Caspase-3及N-乙酞氨基葡萄糖轉移-V(GnT-V)表達的影響；通過Lectin blot方法顯示IL-1β對GnT-V所修飾的所有糖蛋白量的影響；免疫共沉淀方法檢測IL-1β對β1整合素糖基化修飾量的變化；流式細胞術