兔膝關(guān)節(jié)軟骨單位體外酶解法消化、分離的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討兔膝關(guān)節(jié)軟骨單位(Chondron)體外酶解法消化、分離的可行性及實(shí)驗(yàn)方法。
　　 方法：2月齡新西蘭白兔8只，隨機(jī)分為兩組，各4只。無(wú)菌條件下剖取雙膝關(guān)節(jié)全層軟骨，一組采用常規(guī)0.4％Pronase酶和0.025％Ⅱ型膠原酶依次消化為軟骨細(xì)胞；另一組采用0.3％dispase酶和0.2％Ⅱ型膠原酶聯(lián)合攪拌消化3h為軟骨單位。利用倒置顯微鏡觀察、細(xì)胞爬片HE和Ⅵ型膠原免疫熒光染色以及微系統(tǒng)測(cè)試分析儀進(jìn)行軟骨細(xì)胞及單位形

2、態(tài)學(xué)分析，Annexin-Ⅴ/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)軟骨細(xì)胞及單位早期凋亡率。
　　 結(jié)果：倒置顯微鏡下軟骨單位主要由1、2、3或4個(gè)串珠狀細(xì)胞形態(tài)構(gòu)成，透亮程度較差；而軟骨細(xì)胞均表現(xiàn)為單一透亮圓形細(xì)胞形態(tài)。軟骨細(xì)胞HE染色呈爬片形態(tài)，胞質(zhì)膨松透亮；軟骨單位無(wú)明顯爬片，細(xì)胞周圍存在一層淡染的細(xì)胞周基質(zhì)成分。且基質(zhì)成分Ⅵ型膠原免疫熒光陽(yáng)性表達(dá)，界限清晰，可見大量由其包裹1、2、3或4個(gè)細(xì)胞的單位形態(tài)。軟骨單位涂片由高到低均分為細(xì)胞核、