廣東地區(qū)漢族人群血小板HPA基因庫的建立和初步應(yīng)用的研究.pdf

1、研究背景與目的： 血小板特異性抗原（human platelet alloantigens，HPA）是位于血小板膜糖蛋白（GP）上的抗原表位，是血小板本身固有的抗原，這些抗原是由遺傳決定的。血小板膜糖蛋白復(fù)合物主要包括GPⅡb/Ⅲa、GPⅠbN/IX、GPⅠa/Ⅱa、CD109糖蛋白。HPA抗原國際命名使用血清學(xué)方法檢測出的24個血小板抗原，除了Vaa和Moua抗原尚未達到國際命名要求外，其余22個抗原已被血小板命名委員會（Th

2、e Platelet Nomenclature Committee，PNC）正式命名。在這22個抗原中12個抗原被列入6個抗原系統(tǒng)。它們分別是HPA-1～6和HPA-15。HPA基因頻率的分布存在種族和地域差異，研究HPA的基因多態(tài)性可以為群體遺傳學(xué)的研究提供重要數(shù)據(jù)。而且在臨床血小板輸注過程中，如果血小板同種抗原不相匹配，可導(dǎo)致受血者機體產(chǎn)生血小板同種抗體，引起血小板輸注無效（platelet transfution refracto

3、riness，PTR）、輸血后紫癜（posttransfution purpura，PTP）、新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜（neonatal alloimmune thrombocytopenia，NAITP）等疾病。因此，通過對血小板基因分型的研究，對于臨床輸血實踐，解決PTR等具有重要意義，并且能夠預(yù)測血小板特異性同種免疫在不同種族中發(fā)生的可能性。 本研究采用聚合酶鏈-序列特異性引物技術(shù)（Polymerase Chain

4、 Reaction-Sequence-Specific Primers，PCR-SSP）對廣州血液中心500名隨機漢族無償獻血者進行HPA-1～6和HPA-15基因分型，分析HPA的基因多態(tài)性和種族、地域的分布差異，預(yù)測血小板特異性同種免疫在不同種族中發(fā)生的可能性。通過建立廣東地區(qū)健康漢族人群HPA基因庫，為解決產(chǎn)生HPA同種免疫的患者臨床血小板輸注問題奠定了基礎(chǔ)。對于人種的起源、遷徙以及司法鑒定等也具有重要意義。 實驗方法：

5、 留取無償捐獻血小板的獻血員的血液標本3ml，利用TBG自動DNA提取系統(tǒng)，進行DNA提取，于-20℃保存。用DNA濃度測定儀測定提取的DNA濃度和純度。特異性PCR擴增：采用德國CTS公司HPA分型試劑盒，進行HPA-1，2，3，4，5，6，15抗原的檢測。建立廣東地區(qū)漢族人群HPA基因數(shù)據(jù)庫。 實驗結(jié)果： 1．廣東漢族人群頻率最高的等位基因為HPA-4a、HPA-1a和HPA-6a，其次為HPA-5a、HPA-

6、2a，HPA-15a、HPA-3a，等位基因HPA-1b、HPA-2b、HPA-5b、HPA-6b很少見，本研究未檢測到HPA-4b。 2．基因型頻率最高的為HPA-4a4a，該系統(tǒng)未檢測到雜合子，其次為HPA-1a1a、HPA-6a6a、HPA-5a5a、HPA-2a2a。在HPA-1、-2、-4、-5系統(tǒng)中均未發(fā)現(xiàn)bb純合子，HPA-3、-15兩個系統(tǒng)均表現(xiàn)出很高的雜合度，雜合子比兩種純合子都要高出50%。 3．與已

7、報道的亞洲黃種人比較，有顯著性差異的系統(tǒng)有HPA-3、-5（P<0．05）；與非洲及美國黑人比較，HPA-1、-2、-3、-5、-15系統(tǒng)有顯著性差異（P<0．005）；與歐洲白種人比較，有顯著性差異的系統(tǒng)有HPA-1、-3、-5、-15（P<0．05）；與波利西亞人比較，有顯著性差異的系統(tǒng)有HPA-1、-6（P<0．05）； HPA-4無種族間顯著性差異。 4．廣東漢族人發(fā)生HPA同種免疫的可能風險抗原基因主要有HAP-3a、

8、-3b、-15a、-15b；其次分別為HPA-2b、-5b、-6b、-1b。 5．吻合組（輸注ABO血型、HPA基因吻合的血小板）與隨機配型對照組（輸注ABO血型相合，HPA隨機配型的供者血小板）兩組患者血小板輸注后1h，24hCCI值分別有顯著性差異（P<0．05），吻合組CCI顯著高于對照組。說明血小板經(jīng)配型后輸注效果明顯優(yōu)于對照組。 全文結(jié)論： 本研究進一步確認了HPA存在明顯的種族和地域性差異。揭示了廣東

9、漢族人群HPA基因多態(tài)性分布特點，提示廣東漢族人在接受輸血和妊娠等有可能接觸同種異體HPA抗原時產(chǎn)生同種免疫反應(yīng)，發(fā)生HPA同種免疫的風險抗原基因主要有HAP-3a、-3b、-15a、-15b；其次分別為-2b、-5b、-6b、-1b。建立了廣東漢族人群HPA基因資料數(shù)據(jù)庫，建立了詳細的個人資料，為提供適合臨床患者的HPA配合型血小板奠定了基礎(chǔ)。 創(chuàng)新點： 為建立廣東首個血小板HPA基因庫做了基礎(chǔ)性工作，幫助解決由于HP