辣椒素對人子宮內(nèi)膜癌ISHIKAWA細胞的影響.pdf

1、背景：
　　子宮內(nèi)膜癌（Endometrial carcinoma, EC）是發(fā)生于子宮內(nèi)膜的一組上皮惡性腫瘤。近年來，我國子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率逐年升高，居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第二位，目前僅次于宮頸癌，嚴重威脅女性健康。至今尚未找到有效預防和治療子宮內(nèi)膜癌的靶點。
　　辣椒素是高香草酸衍生物，是全世界廣泛應用的蔬菜和香料辣椒中的主要活性成分。辣椒作為傳統(tǒng)藥物已有上千年歷史。辣椒素的外用膏藥已被用于臨床上治療皰疹性神經(jīng)痛、糖尿

2、病神經(jīng)病變患者疼痛和類風濕性關(guān)節(jié)炎患者疼痛等。近年來，大量研究表明辣椒素在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中通過其受體TRPV1（transient receptor potential vanilloid1, TRPV1）依賴性或非依賴性途徑發(fā)揮抗癌作用。但是辣椒素在人子宮內(nèi)膜癌中的作用尚未見報道。
　　目的：
　　觀察不同人子宮內(nèi)膜癌細胞系辣椒素受體TRPV1的表達情況，并探討分析辣椒素對TRPV1表達陽性的人子宮內(nèi)膜癌細胞系的

3、增殖、凋亡及細胞周期的影響，以期為子宮內(nèi)膜癌的臨床治療提供新思路、新方法。
　　方法：
　　1細胞培養(yǎng)將人子宮內(nèi)膜癌細胞系ISHIKAWA、HEC-1A、HEC-1B、KLE分別接種于含10％胎牛血清的DMEM/F12，DMEM培養(yǎng)液中，置于37℃、5%CO2的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　2 Western免疫印跡檢測四種人子宮內(nèi)膜癌細胞系的TRPV1表達將處于對數(shù)生長期的人子宮內(nèi)膜癌細胞提取蛋白，Western-Bl

4、ot檢測其TRPV1的表達情況。
　　3細胞增殖實驗 MTT法檢測辣椒素刺激后細胞增殖情況選取TRPV1表達陽性的人子宮內(nèi)膜癌細胞系，以不同濃度的辣椒素刺激不同時間，MTT法檢測其體外增殖情況。
　　4流式細胞檢測分析流式細胞技術(shù)檢測辣椒素刺激后細胞凋亡率和周期分布
　　細胞凋亡檢測：常規(guī)培養(yǎng)細胞至70%融合時，加入不同濃度辣椒素刺激，繼續(xù)培養(yǎng)細胞24小時后，分別收集細胞。用預冷PBS洗細胞2次，離心棄上清，用含Ann

5、exin V-FITC和PI染色液室溫避光條件下孵育，然后用流式細胞儀檢測細胞凋亡率。
　　細胞周期檢測：常規(guī)培養(yǎng)細胞至70%融合時，加入不同濃度辣椒素刺激，繼續(xù)培養(yǎng)細胞24小時后，分別收集細胞。70%的乙醇固定，4℃過夜， PBS清洗后重懸，含RNA酶的PI染液37℃孵育30分鐘，送檢。
　　5統(tǒng)計分析：所有實驗均重復三遍，數(shù)據(jù)采用SPSS21.0統(tǒng)計學軟件進行處理。采用GraphPad Prism5.0軟件進統(tǒng)計圖制作，

6、所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示，采用One-way ANOVA分析，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1 TRPV1蛋白在人子宮內(nèi)膜癌細胞系中的表達：ISHIKAWA細胞系表達TRPV1蛋白，而HEC-1A，HEC-1B，KLE細胞系均未檢測到TRPV1蛋白表達。
　　2辣椒素對ISHIKAWA細胞增殖活性的影響：隨著辣椒素刺激濃度的增高和作用時間的延長，ISHIKAWA細胞的增殖活性逐漸下降，辣椒素對體外培

7、養(yǎng)的ISHIKAWA細胞具有明顯的抑制作用，且具有濃度和時間依賴性。
　　3辣椒素對ISHIKAWA細胞凋亡率影響：ISHIKAWA細胞經(jīng)0、200和400μmol/L辣椒素處理24 h后，細胞凋亡率分別為：16.08±7.96%、60.93±2.99%、75.18±3.18%，其中早期凋亡比例分別為8.15±3.80%、54.02±6.46%和50.39±15.08%，晚期凋亡比例為7.93±7.60%、6.91±3.62%、2

8、4.79±13.36%，藥物處理組總體凋亡率較對照組明顯升高，且有濃度依賴現(xiàn)象，差異具有顯著性（F=98.861，P=0.000），進一步分析顯示ISHIKAWA細胞凋亡主要集中在早期，200和400μmol/L辣椒素處后早期凋亡率均明顯升高，且與對照組相比均有統(tǒng)計學差異（F=20.642, P=0.002），而晚期凋亡較對照組升高不明顯（F=2.209, P=0.191），總的來說，辣椒素可明顯誘導ISHIKAWA細胞凋亡，隨著凋亡率

9、的增加，活細胞所占比例也顯著減少。
　　4辣椒素對ISHIKAWA細胞周期分布的影響：分別以0、200和400μmol/L辣椒素處理24 h后，ISHIKAWA細胞周期分布如下：G0/G1期細胞比例分別為53.84±3.04％、59.43±2.69％和70.95±0.79％；S期細胞分別為26.38±8.32％、14.81±3.23％和20.48±1.84％；G2/M期細胞分別為
　　19.78±7.53％、15.76±3.

10、23％和8.57±1.28％，即藥物處理組G0/G1期細胞所占比例較對照組明顯增加，且差異具有顯著性（F=7.950, P=0.021）。
　　結(jié)論：
　　1人子宮內(nèi)膜癌ISHIKAWA細胞系表達TRPV1蛋白，而HEC-1A、HEC-1B和KLE人子宮內(nèi)膜癌細胞系均未檢測到TRPV1蛋白表達。
　　2辣椒素可抑制體外ISHIKAWA細胞的增殖。
　　3辣椒素可誘導體外ISHIKAWA細胞凋亡。
　　4辣椒