MK調(diào)節(jié)小鼠子宮蛻膜細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、胚胎著床是人類和哺乳動(dòng)物生殖過程中妊娠建立的第一步,也是決定妊娠成功與否的關(guān)鍵。成功的植入取決于處于接受態(tài)的子宮內(nèi)膜和具有侵入性的胚胎之間的同步協(xié)調(diào)反應(yīng)。子宮內(nèi)膜接受態(tài)的改變涉及到眾多基因的調(diào)控以及錯(cuò)綜復(fù)雜的調(diào)節(jié)因子網(wǎng)絡(luò),其中細(xì)胞增殖與凋亡等復(fù)雜的分子細(xì)胞事件對(duì)這一改變的順利進(jìn)行起著重要作用。TRAIL為TNF家族成員,能夠與死亡受體結(jié)合誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,在小鼠MK為TRAIL唯一的死亡受體,所以MK可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。蛻膜是子宮內(nèi)膜

2、間質(zhì)分化形成的一種特殊組織,蛻膜細(xì)胞具有腫瘤細(xì)胞大核多核的特點(diǎn),它對(duì)妊娠的建立和維持至關(guān)重要。已有實(shí)驗(yàn)證明MK在蛻膜細(xì)胞中表達(dá),因此推測(cè)MK可能在小鼠蛻膜細(xì)胞的凋亡過程中起著重要作用。
　　 目的：探討MK對(duì)小鼠子宮蛻膜細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用,為胚胎著床的分子機(jī)理補(bǔ)充新的證據(jù)。
　　 方法：⑴采用分子克隆技術(shù),構(gòu)建MK重組腺病毒；⑵從妊娠d4小鼠的子宮組織中提取基質(zhì)細(xì)胞并人工誘導(dǎo)蛻膜化；⑶免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)妊娠小鼠子宮蛻膜

3、細(xì)胞感染重組腺病毒后催乳素的表達(dá)變化；⑷流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)蛻膜細(xì)胞感染重組腺病毒后細(xì)胞凋亡情況；5.妊娠d4小鼠宮角注射MK腺病毒,于d8觀察著床胚胎數(shù)。
　　 結(jié)果：①成功構(gòu)建了MK重組過表達(dá)與干擾表達(dá)腺病毒,過表達(dá)腺病毒滴度為5.3×1011pfu/ml,干擾表達(dá)腺病毒滴度為6.8×1011pfu/ml；②免疫細(xì)胞化學(xué)顯示,感染MK過表達(dá)腺病毒的蛻膜細(xì)胞的催乳素含量減少,而感染MK干擾表達(dá)腺病毒的蛻膜細(xì)胞催乳素含量增加；③流式細(xì)