HDACi對(duì)苯致再障小鼠TOPOⅡα表達(dá)水平變化的機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　苯作為一種常用工業(yè)原料，可經(jīng)多途徑進(jìn)入人體，而骨髓細(xì)胞則為苯誘導(dǎo)產(chǎn)生毒性的靶器官之一。體外研究顯示苯及其代謝產(chǎn)物可通過影響TOPOⅡα啟動(dòng)子相關(guān)基因的甲基化和組蛋白的乙?；揎棧绊懟虻恼＾D(zhuǎn)錄、復(fù)制和蛋白翻譯。同時(shí)，苯中毒動(dòng)物模型研究顯示在體內(nèi)苯及其代謝物可引起骨髓細(xì)胞的凋亡，致外周血三系下降，對(duì)DNA造成損傷?？喙系鞍?MCP30)作為一種組蛋白去乙酰化酶抑制劑，能抑制組蛋白去乙?；傅幕钚?，提高組蛋白乙酰化程度

2、。本課題組旨在研究苯及其代謝物對(duì)小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞TOPOⅡα表達(dá)的調(diào)控機(jī)制，即TOPOⅡα啟動(dòng)子組蛋白乙?；礁淖儯约敖M蛋白去乙?；敢种苿┛喙系鞍?MCP30)對(duì)其的逆轉(zhuǎn)作用。
　　方法:
　　1、動(dòng)物模型的建立:
　　(1)將140只6-7周齡雄性CD1小鼠按體重隨機(jī)分配為6組間斷長期苯蒸氣吸入以及藥物注射，分別為A組(0ppm+NS)、B組(300ppm+NS)、C組(0ppm+TSA)、D組(300ppm

3、+TSA)、E組(0ppm+MCP30)、F組(300ppm+MCP30)。A、B兩組各30只，其余四組各20只。藥物干預(yù):吸苯日吸苯前予腹腔注射藥物TSA、MCP30，劑量均為為1mg/kg。
　　(2)各組小鼠分別于造模前及造模結(jié)束兩天后進(jìn)行外周血三系計(jì)數(shù)。小鼠頸椎脫臼處死后，分離雙側(cè)股骨及脛骨，留取股骨做病理進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。
　　2、取各組小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞:
　　(1)RT-PCR測(cè)定各組小鼠TOPOⅡα啟動(dòng)子

4、各調(diào)控因子(SP1、ATF-2、SP3、C-MYB、IBCP90) mRNA表達(dá)水平的改變。
　　(2)染色質(zhì)免疫沉淀分析法(ChIP)檢測(cè)TOPOⅡα含量變化與TOPOⅡα啟動(dòng)子組蛋白H3、H4乙?；礁淖兊年P(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1、B組小鼠吸苯后較吸苯前外周血三系計(jì)數(shù)明顯下降，分別下降37.9％、11.3％，27.5％(P＜0.05)。B組較A組外周血三系亦明顯下降，分別下降42.2％、12.2％、29.6％(

5、P＜0.05)。骨髓病理形態(tài)學(xué)檢查顯示造血細(xì)胞減少，非造血細(xì)胞如脂肪細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等增加。D組較B組外周血三系計(jì)數(shù)有所上升，分別上升43.7％、6.2％、22.2％(P＜0.05)。F組較B組外周血三系計(jì)數(shù)有所上升，分別上升42.1％、6.1％、19.4％(P＜0.05)。D組、F組骨髓病理形態(tài)學(xué)檢查顯示造血細(xì)胞較B組增多。
　　2、拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα啟動(dòng)子調(diào)控因子mRNA水平各組的變化:
　　(1)SP1、C-MYB mRNA

6、表達(dá)水平:B組較A組明顯降低，D組和F組較B組升高，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　(2)ATF-2、ICBP90 mRNA表達(dá)水平:B組較A組、D組和F組較B組不變，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(3)SP3 mRNA表達(dá)水平:B組較A組明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。D組和F組較B組降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3、與乙?；M蛋白H3、H4結(jié)合的拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα啟動(dòng)子水平變化:
　　(1)

7、與乙?；M蛋白H3結(jié)合的拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα啟動(dòng)子水平，B組水平較A組明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。D組水平較B組明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);F組水平較B組明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(2)與乙酰化組蛋白H4結(jié)合的拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα啟動(dòng)子水平，B組水平較A組明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。D組、F組水平分別較B組明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1

8、. MCP30對(duì)苯致小鼠再生障礙性貧血外周血三系、骨髓造血組織的損傷具有逆轉(zhuǎn)作用。
　　2. 拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα啟動(dòng)子各調(diào)控因子mRNA表達(dá)水平的改變:B組與A組相比，SPl、C-MYB mRNA表達(dá)水平降低，SP3 mRNA表達(dá)水平升高，MCP30對(duì)其均有逆轉(zhuǎn)作用，而ATF-2、ICBP90 mRNA表達(dá)水平不變。
　　3. 實(shí)驗(yàn)研究則顯示TOPOⅡα含量降低與TOPOⅡα啟動(dòng)子組蛋白H3、H4乙?；浇档陀嘘P(guān)，MCP30對(duì)